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文檔簡介
1、目的:探索人類結(jié)核性胸腔積液(Tuberculosis pleuraleffusion, TPE)中分泌IL-27的CD4+T細(xì)胞;探索體外誘導(dǎo)naiveCD4+ T細(xì)胞分化為Th27細(xì)胞的細(xì)胞因子及其胞內(nèi)信號(hào)通路;探索Th27細(xì)胞的特征轉(zhuǎn)錄因子。
方法:以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎患者TPE及外周血(Peripheral blood, PB)CD4+T細(xì)胞中IL-27、IFN-γ、IL-4、IL-9、IL-17和IL-22,
2、c-Fos、T-bet、GATA-3、PU.1、RORγt和AHR的表達(dá)水平;體外用IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-9等細(xì)胞因子及其不同組合,誘導(dǎo)naiveCD4+T細(xì)胞分化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分化過程中IL-27、c-Fos、T-bet、以及STAT家族蛋白磷酸化的表達(dá)水平,并且采用STAT阻斷劑,觀察其對(duì)Th27細(xì)胞分化效應(yīng)的影響;核轉(zhuǎn)染c-Fos-siRNA、T-bet-siRNA,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)Th27細(xì)胞分化效
3、應(yīng)的影響。
結(jié)果:TPE中Th27細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例顯著低于PB;TPE中Th27細(xì)胞百分比與Th1細(xì)胞(IFN-γ+IL-27-CD4+cells)百分比呈線性負(fù)相關(guān)關(guān)系;TPE及PB中Th27細(xì)胞表達(dá)高水平c-Fos及中等量的T-bet,并且不表達(dá)IL-4、IL-9、IL-17和IL-22,以及相應(yīng)Th亞群轉(zhuǎn)錄因子GATA-3、PU.1、RORγt和AHR。
體外實(shí)驗(yàn)表明,IL-1β、I L-2、IL-12
4、既可單獨(dú)又可組合促進(jìn)na ive C D4+T細(xì)胞向Th27細(xì)胞分化,同時(shí)促進(jìn)c-Fos及T-bet在CD4+T細(xì)胞中的表達(dá),IL-1β+IL-2 +IL-12促進(jìn)效應(yīng)最強(qiáng),而TGF-β卻抑制這一分化過程;IL-1β+I L-2+IL-12對(duì)IL-27、c-Fos、T-bet表達(dá)的促進(jìn)作用呈時(shí)間依賴性。
IL-1β+IL-2+IL-12可顯著誘導(dǎo)naiveCD4+T細(xì)胞中磷酸化蛋白STAT3(ser727)、STAT
5、4(tyr693)、STAT5(tyr694)的表達(dá);分別添加STAT3、STAT4、STAT5抑制劑后,naiveCD4+T細(xì)胞在IL-1β+IL-2+IL-12誘導(dǎo)環(huán)境中IL-27、c-Fos、T-bet的表達(dá)減少,同時(shí)添加STAT3、S TAT4、STAT5抑制劑產(chǎn)生的抑制效應(yīng)最強(qiáng)。
核轉(zhuǎn)染c-Fos-siRNA、T-bet-siRNA后,IL-1β+IL-2+IL-12誘導(dǎo)的naiveCD4+T細(xì)胞向Th27細(xì)胞分化受
6、抑,共轉(zhuǎn)染c-Fos-siRNA+T-bet-siRNA后,產(chǎn)生的抑制效應(yīng)最強(qiáng)。
結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,TPE中存在一種全新輔助性T細(xì)胞亞群——Th27細(xì)胞。在體外,IL-1β、IL-2、IL-12及其組合可通過誘導(dǎo)磷酸化蛋白STAT3(ser727)、STAT4(tyr693)、STAT5(tyr694)表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)naiveCD4+T細(xì)胞向Th27細(xì)胞分化;c-Fos及T-bet表達(dá)于Th27細(xì)胞,并且對(duì)Th27細(xì)胞的分化
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