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文檔簡介
1、目的:
幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是一種螺旋形,微需氧(生長在低氧氣張力),具有鞭毛,革蘭氏陰性的細(xì)菌。由于其能長期定植于人的胃部,可以引起多種胃部疾病,例如慢性胃炎,消化性潰瘍并與胃癌和黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤(MALT)的發(fā)生有著密切的關(guān)系。流行病學(xué)研究表明世界范圍內(nèi)一半以上的人口(在發(fā)展中國家高達(dá)90%)攜帶有H.pylori,盡管只有約20%的攜帶者表現(xiàn)出相關(guān)的疾病,但H.
2、pylori引起人類感染性疾病僅次于變異鏈球菌。1994年,美國國立衛(wèi)生研究所和世界衛(wèi)生組織癌癥研究中心將H.pylori列為第一類致癌因子。
目前,由于沒有任何一種抗生素可以根除H.pylori的感染,臨床上主要采用質(zhì)子泵抑制劑PPI(和膠體鉍劑)聯(lián)合兩種抗生素構(gòu)成的三聯(lián)或四聯(lián)療法來治療H.pylori感染。但是,隨著抗生素的廣泛使用,H.pylori耐藥菌菌株的增多,使得臨床治療效果日益下降,統(tǒng)計(jì)顯示,經(jīng)過臨床治療后,
3、仍有約10%~20%的患者存在持續(xù)性感染。而近來的研究表明,H.pylori對常用抗生素耐藥的原因不僅與其自身基因的遺傳學(xué)改變有關(guān),而且與H.pylori在感染部位形成的生物膜有著密不可分的關(guān)系。
當(dāng)細(xì)菌以生物膜形式存在時(shí),耐藥性明顯增強(qiáng)(高達(dá)1000倍),單純的抗生素應(yīng)用不能有效清除生物膜,還可以誘導(dǎo)耐藥性的產(chǎn)生。生物膜的耐藥機(jī)制不同于浮游菌,有效濃度的抗菌藥物能迅速殺死浮游生長的細(xì)菌和生物膜表面的細(xì)菌,但是對于生物膜深
4、處的細(xì)菌卻難以殺滅。近來的國內(nèi)外研究顯示,蒜素類有機(jī)硫化合物不但具有廣譜的抗菌作用,對于以生物膜形式存在的白色假絲酵母和葡萄球菌等也有較好的殺滅作用。然而,關(guān)于H.pylori所形成BF對抗生素的抵抗作用究竟如何卻并不清楚;并且,針對H.pylori所形成BF有效的干預(yù)策略的研究尚十分少見。
我們的研究主要探討H.pylori的BF對抗生素的抵抗作用,以及大蒜素和其衍生物DATS對H.pylori形成BF后的干預(yù)效果,探究
5、其中的作用機(jī)制,以期為臨床預(yù)防和治療提供有效的線索。
方法:
1.微量肉湯稀釋法測定克拉霉素和大蒜素以及DATS對浮游狀態(tài)下的H.pylori的MIC,評價(jià)幾種藥物對浮游狀態(tài)下H.pylori的殺滅作用。
2.在測得的MIC的基礎(chǔ)上,調(diào)整藥物濃度,做不同藥物的時(shí)間殺菌曲線。
3.選取H.pyloriNCTC11637為目標(biāo)菌株,利用NC膜作為載體,建立H.pylori的體外BF模型
6、。
4.在H.pylori體外BF模型的基礎(chǔ)上,檢測克拉霉素以及大蒜素和DATS對BF干預(yù)作用,將結(jié)果進(jìn)行對比。
5.利用掃描電鏡觀察生物膜形態(tài)
6.利用CLSM對不同藥物處理后的BF進(jìn)行分析,探究不同藥物處理后BF的結(jié)構(gòu)變化并比較內(nèi)部不同層次菌體的活性狀態(tài)。
結(jié)果:
1.微量肉湯法藥敏試驗(yàn)顯示,所選菌株對克拉霉素敏感,不存在耐藥現(xiàn)象;大蒜素和DATS對受試菌株也均有
7、良好的殺滅作用。
2.通過時(shí)間殺菌曲線發(fā)現(xiàn),所選濃度下大蒜素和DATS對受試菌株的殺滅作用較克拉霉素更為迅速,殺菌效果更佳。
3.成功建立了H.pylori的體外BF模型。
4.用不同濃度的克拉霉素,大蒜素和DATS處理BF后發(fā)現(xiàn),H.pylori在形成BF以后,對克拉霉素的抵抗作用大大增加,所用初試濃度處理后,其活性約有50%的下降,但是隨著濃度的提高,其活性并沒有更加顯著的下降。而大蒜素和D
8、ATS處理后,BF的活性呈現(xiàn)顯著下降,并且隨著藥物濃度的升高,其活性水平依次減低,呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。
5.掃描電鏡下可見生物膜表面細(xì)菌聚集生長,周圍有黏性的基質(zhì)包裹菌體,中間分布著不規(guī)則的孔洞。
6.CLSM結(jié)果發(fā)現(xiàn),克拉霉素處理BF后,其表層細(xì)菌得到有效的殺滅,而深層細(xì)菌活性仍然較高;而經(jīng)大蒜素和DATS處理后的BF,由表層到深層的細(xì)菌都被有效殺滅。并且,經(jīng)過大蒜素和DATS處理后的BF結(jié)構(gòu)被破壞,變得松散,
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