他汀對高糖情況下微血管纖溶酶原激活物抑制物-1產(chǎn)生的影響及其信號機制的研究.pdf

1、血管病變是糖尿病最嚴重的并發(fā)癥，大多數(shù)糖尿病患者死于心腦血管動脈粥樣硬化和糖尿病腎病。糖尿病微血管病變患者發(fā)生心血管事件的風險顯著增高，因此，對2型糖尿病微血管病變進行關注和研究，對于防治大血管事件，減少患者死亡率顯得極為重要。纖溶蛋白溶解系統(tǒng)活性異常是糖尿病微血管并發(fā)癥的因素之一，其中最重要的纖溶抑制物是纖溶酶原激活抑制物-1（plasminogen activator inhibitor, PAI-1）。PAI-1是聯(lián)系著心腦血管疾

2、病發(fā)生發(fā)展的重要分子。
　　他汀除了降脂以外還具有其他方面的有益作用，如促纖溶、改善內(nèi)皮功能及抗凝聚等作用。他汀是否對糖尿病微血管并發(fā)癥患者的纖溶功能產(chǎn)生更多的獲益作用，他汀又是通過什么機制產(chǎn)生促纖溶效應的，這些問題是本項研究的主要內(nèi)容。
　　第一部分辛伐他汀對伴有微血管并發(fā)癥的2型糖尿病患者纖溶酶原激活物抑制物-1的影響
　　目的：觀察辛伐他汀對2型糖尿病（T2DM）有或無微血管并發(fā)癥患者纖溶酶原激活物抑制物-1（P

3、AI-1）水平的影響。
　　方法：研究129例2型糖尿病，包括50例單純糖尿病及79例糖尿病微血管并發(fā)癥以及56例正常對照，ELISA法測定血漿PAI-1的水平，并隨訪糖尿病伴或不伴微血管并發(fā)癥患者服用或不服用辛伐他汀3個月后PAI-1值的變化。并同時檢測一般血脂、血糖生化指標。
　　結果：與正常對照相比，糖尿病組PAI-1水平顯著增高（P<0.01），糖尿病微血管并發(fā)癥組 PAI-1水平顯著高于單純糖尿病組（P<0.01）

4、。具有1種微血管并發(fā)癥與同時合并2種或以上微血管并發(fā)癥的患者相比，PAI-1水平無差異。2型糖尿病患者辛伐他汀治療3個月均比治療前PAI-1水平顯著降低，其中微血管并發(fā)癥組服用他汀3個月后PAI-1值較未服他汀的微血管并發(fā)癥組顯著降低，并且降低程度大于他汀治療的單純糖尿病組。
　　結論：2型糖尿病患者存在纖溶功能受損，其中合并微血管并發(fā)癥者纖溶功能受損較單純糖尿病更為嚴重。辛伐他汀顯著改善了纖溶功能，微血管并發(fā)癥患者服用辛伐他汀對

5、纖溶功能的改善更為獲益。
　　第二部分兩種分離大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞方法的比較及改良
　　目的：比較酶消化法和組織塊貼壁法分離成年大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞的方法并進行改良，以獲得較高純度和活性的細胞。
　　方法：分別采用組織塊貼壁法和酶消化法分離大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞，并對方法進行改良。對分離傳代的細胞進行表面特異性抗原CD31免疫熒光鑒定。
　　結果：兩種方法都獲得了心臟微血管內(nèi)皮細胞，CD31鑒定細胞陽性率在9

6、5%以上。兩種方法相比，酶消化法具有獲得所需的細胞時間相對短，穩(wěn)定可靠，細胞純度高等特點。
　　結論：使用酶消化法可獲得純度高、狀態(tài)良好的心臟微血管內(nèi)皮細胞，該法培養(yǎng)的細胞可用于后續(xù)試驗。
　　第三部分他汀抑制高糖誘導的心臟微血管內(nèi)皮細胞纖溶酶原激活物抑制物-1表達的信號通路機制研究
　　目的：通過研究辛伐他汀和阿托伐他汀抑制高糖誘導心臟微血管內(nèi)皮細胞（CMEC）PAI-1表達的影響，探討他汀調(diào)控高糖誘導CMEC表達P

7、AI-1的信號機制。
　　方法：原代培養(yǎng)大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞，在含糖5.7 mM至23 mM的培養(yǎng)基作用下，Real-time PCR法測定PAI-1 mRNA的表達，ELISA和western blot法分別測定培養(yǎng)上清及內(nèi)皮細胞PAI-1蛋白含量。Pull down法測定RhoA的活性，western blot測定IκBα的蛋白表達，凝膠電泳遷移率（EMSA）測定IκBα的活化，雙熒光素酶報告基因測定IκBα的轉(zhuǎn)錄活性。

8、r>　　結果：PAI-1 mRNA及蛋白水平隨著培養(yǎng)基糖濃度的升高而升高，但是辛伐他汀及阿托伐他汀能顯著抑制該效應（P<0.01），并且抑制效應可被甲羥戊酸（MVA，100μm）及焦磷酸牛龍牛兒基牛龍牛兒酯（GGPP，10μm）逆轉(zhuǎn)，而不能被焦磷酸法尼酯（FPP，10μm）所逆轉(zhuǎn)。RhoA抑制劑C3胞外酶（5μg/mL）、RhoA激酶抑制劑 Y-27632（10μm）、羥基法舒地爾（10μm）及NF-κB抑制劑BAY11-7082（5μ