抗人肝癌標(biāo)志物MXR7單克隆抗體的制備與臨床應(yīng)用研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文抗人肝癌標(biāo)志物MXR7單克隆抗體的制備與臨床應(yīng)用研究姓名：吳秀菊申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王紅陽;吳孟超2002.5.1蔓三! 墾查竺! 查竺竺塑奎 一．一—————————————————————————————————————————一中文摘要 R 7 j 77( 原發(fā)性肝細(xì)胞癌( H e p a t o c e l l l l l a rc a r c i n o m a ，H

2、C C ) ，簡稱肝癌，是惡性腫瘤中對人體造成嚴(yán)重威脅，死亡率很高的疾病。目前，就世界范圍而言，其發(fā)病率呈上升趨勢，手術(shù)切除仍是主要的治療手段。作為一種高死亡率的疾病，肝癌的病因、發(fā)生發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及診斷和治療都越來越引起人們的關(guān)注。其中，肝癌的早期診斷是提高總體療效的關(guān)鍵，同時對于患者的轉(zhuǎn)歸以及預(yù)后都具有十分重要的意義【㈨。在腫瘤的臨床研究和實踐中，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療是延長病人生存期的關(guān)鍵。腫瘤標(biāo)志物( T u m o

3、r m a r k e r ，T M ) 在腫瘤普查、診斷、判斷預(yù)后和轉(zhuǎn)歸、評價治療療效和高危人群隨訪觀察等方面都具有較大的臨床實用價值‘7 ．9 】。自8 0 年代以來，隨著應(yīng)用B 淋巴細(xì)胞雜交瘤制備腫瘤單克隆抗體技術(shù)的不斷成熟，出現(xiàn)了大量抗腫瘤的單克隆抗體，并與同時出現(xiàn)_ t E E ] 新月異的免疫學(xué)檢測技術(shù)( R I A 、I R M A 、E L I S A 、C L I A 、I F A 、T R F I A 等) 相結(jié)合，

4、發(fā)展了眾多的腫瘤標(biāo)志物檢測項目并不斷地結(jié)合應(yīng)用于l | 每床，已成為腫瘤普查、早診和隨訪的一個重要檢查指標(biāo)。M X R 7 基因是1 9 9 5 年L a g e 等人通過差異雜交方法從抗米托蒽醌的人胃癌細(xì)胞系分離克隆的【l o 】。隨后，我們在研究肝癌特異性敏感標(biāo)志基因時，從肝癌c D N A文庫分離得到M X R 7 基因。該基因全長c D N A 序列為2 2 6 3 b p ，定位于人染色體X q 2 6 ，由8 個外顯子組成，

5、編碼由5 8 0 個氨基酸組成的硫酸肝素類蛋白聚糖( H e p a r a ns u l f a t ep r o t e o g l y c a n s ，H S P G ) ，分子量6 6k D a ，通過糖基磷脂酰肌醇( O b c o s y l ．p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l ，G P I ) 錨連接于細(xì)胞膜，屬于蛋白聚糖家族。該基因大量表達(dá)于胎盤以及胎兒肝臟、肺臟和腎臟，被

6、認(rèn)為參與發(fā)育期形態(tài)發(fā)生和生長調(diào)控。我們的研究與文獻(xiàn)報道均表明，M X R 7 與肝癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。另外，由于M X R 7 在肝癌的惡性進(jìn)展中的表達(dá)水平逐漸增高，使之可能成為用于判斷肝癌的預(yù)后或抗肝癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要的靶基因。因此，M X R 7 基因己成為一個潛在的具有重要臨床應(yīng)用價值的新的肝癌標(biāo)志物[ 1 1 - 1 3 1 。夕‘本研究的第一部分，是抗原純化。我們從人胎盤c D N A 中克隆了5 ’端缺失瑚如m 耽婦括嘲