熱體克蛋白90介導二氮嗪對抗心臟低溫保存損傷的作用和機制研究.pdf

1、心臟移植是一種用于治療嚴重冠心病等終末期心臟病患者的有效的外科手段,成功的器官保存是心臟移植手術成功的必要前提。然而,目前臨床上心臟的低溫保存時間局限在4至6h以內,這與其它器官如肝、腎、胰的保存時間相比要短的多。如何有效地延長供心的保存時間是當前迫切需要解決的問題。研究發(fā)現(xiàn)在Celsior心臟保存液中添加二氮嗪,能促進長時低溫保存后心功能的恢復并減少心肌細胞凋亡。熱休克蛋白90(Heatshock protein90,Hsp90)是一

2、類高度保守的蛋白質家族的成員之一。Hsp90表達增加可誘導細胞保護作用,其機制被認為與其抗凋亡作用相關。然而,Hsp90是否參與了二氮嗪對抗低溫保存誘導的心肌細胞凋亡作用尚不明了。
　　 目的：
　　 研究Hsp90是否參與了二氮嗪對抗低溫保存誘導的心功能下降,同時探究其可能機制。
　　 方法：
　　 (1)低溫保存模型的建立及心功能測定:離體大鼠心臟于Langendorff恒壓灌注裝置上平衡后,經主動脈

3、根部灌注4℃的Celsior心麻痹液,灌注時間控制在3min以內,心臟表面同時降溫,待心臟停跳后分別置于不同成分的心麻痹液中(4℃)保存,3、6、或9h后心臟被重新置于Langendorff裝置上再灌注60min。灌注條件同保存前保持一致。通過MedLab生物信號采集處理系統(tǒng)觀察左心室發(fā)展壓(LVDP)。
　　 (2)細胞凋亡測定:取復灌末期大鼠左心室心尖部分,用TUNEL法觀察細胞凋亡情況。計算陽性凋亡細胞占總細胞數的百分比即

4、為細胞凋亡指數(apoptosisindex,AI)。
　　 (3)Bid表達:取復灌末期大鼠心臟左心室心尖部分,勻漿提蛋白,用WesternBlot來檢測Bid和tBid蛋白表達情況。
　　 (4)Hsp90表達:取復灌末期大鼠心臟左心室心尖部分,用RT-PCR檢測Hsp90mRNA水平,用WesternBlot來檢測Hsp90蛋白質水平。
　　 結果：
　　 (1)心臟于單純Celsior保存液中低溫

5、保存3-9h后,于復灌60min末測得各組心臟LVDP恢復率隨著保存時間的延長而逐漸降低,心肌細胞凋亡指數隨著保存時間的延長而逐漸升高。而與單純Celsior保存液組相比,心臟在添加了二氮嗪(30μM)的保存液中保存9h后LVDP恢復率顯著增高,心肌細胞凋亡指數顯著下降。
　　 (2)心臟于單純Celsior保存液中低溫保存3h后,Bid蛋白表達量與對照組無明顯差異,且無明顯裂解。低溫保存6h或9h后,Bid裂解后產生的tBid

6、(truncatedBid)片段量顯著增加;然而,在心臟保存液中添加二氮嗪后,Bid裂解明顯受抑制。
　　 (3)與對照組相比,心臟于Celsior液低溫保存3h,Hsp90mRNA與蛋白表達水平均明顯增加。但隨著保存時間延長至6-9h,Hsp90mRNA與蛋白表達水平卻逐漸降低。與9h單純保存液組相比,二氮嗪組心臟Hsp90mRNA與蛋白表達水平均顯著提高。
　　 (4)發(fā)17-AAG可部分取消二氮嗪增加低溫保存心臟L