IL-21與B細(xì)胞PTEN-PI3K-Akt信號(hào)通路調(diào)控異常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的: IL-21通過對(duì)B細(xì)胞功能的雙向性調(diào)節(jié),在體液免疫中發(fā)揮重要作用。BCR下游P13K/Akt信號(hào)通路的過度活化直接參與自身反應(yīng)性B細(xì)胞的生成,并誘導(dǎo)狼瘡樣自身免疫病理損傷。本論文旨在以PTEN/P13K/Akt信號(hào)通路為切入點(diǎn),探索IL-21/IL-21R是否能夠通過對(duì)B細(xì)胞P13K/Akt信號(hào)通路的調(diào)控發(fā)揮體液免疫負(fù)調(diào)作用,及其參與狼瘡自身反應(yīng)性B淋巴細(xì)胞生成的內(nèi)在機(jī)制。
　　 研究方法:
　　 本論文主要應(yīng)用

2、流式細(xì)胞術(shù)和熒光定量PCR的方法,在體外培養(yǎng)體系中,對(duì)IL-21在健康個(gè)體和系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者B細(xì)胞的功能調(diào)控差異做了較為系統(tǒng)的研究。分別在1)IL-21/IL-21R下游調(diào)控激酶的磷酸化水平；2)P13K/Akt信號(hào)通路負(fù)調(diào)因子PTEN的表達(dá)與IL-21刺激的相關(guān)性；3)參與生發(fā)中心B細(xì)胞功能調(diào)控的趨化因子CXCR4與CXCR5在IL-21作用下的表達(dá)變化；4)狼瘡B細(xì)胞對(duì)IL-21刺激的增殖分化以及5)IL-21相關(guān)的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(

3、Breg)的誘導(dǎo)幾個(gè)方面對(duì)IL-21/IL-21R信號(hào)在病理狀態(tài)下的功能異常改變與健康個(gè)體進(jìn)行了比較。
　　 結(jié)果:
　　 1、IL-21共刺激可明顯下調(diào)CD40L和anti-IgM誘導(dǎo)的Akt的活化。IL-21對(duì)Akt活化的負(fù)調(diào)作用在SLE患者外周血B細(xì)胞中存在明顯缺陷。而IL-21誘導(dǎo)的STAT3的磷酸化水平在SLE和HC之間沒有顯著差異。
　　 2、P13K/Akt信號(hào)通路負(fù)調(diào)因子PTEN在SLE B細(xì)胞的

4、表達(dá)明顯下調(diào),且PTEN的低表達(dá)與疾病活動(dòng)程度相關(guān)。IL-21和/或CD40L/anti-IgM刺激能夠上調(diào)正常人外周血PTEN的表達(dá),而SLE B細(xì)胞PTEN表達(dá)量在抗原活化和IL-21刺激后均不能有效上調(diào)。
　　 3、IL-21和或CD40L/anti-IgM刺激參與生發(fā)中心B細(xì)胞CXCR4的表達(dá)下調(diào),后者有效下調(diào)是防止B細(xì)胞過度活化和促進(jìn)B細(xì)胞通過BCR篩選維持自身耐受的重要條件之一.而SLE B細(xì)胞CXCR4的表達(dá)量在抗

5、原活化和IL-21刺激后均不能有效下調(diào)。
　　 4、IL-21在不需要CD40L/anti-IgM共刺激信號(hào)輔助下,就都?jí)虼龠M(jìn)狼瘡B細(xì)胞的增殖、分化和抗體類別轉(zhuǎn)換。
　　 5、外周血CD19+IgD+CD38hiB細(xì)胞的數(shù)量和功能活化狀態(tài)在SLE中存在明顯異常。
　　 6、IL-21能夠刺激正常人外周血CD19+IgD+CD38hiB細(xì)胞分泌IL-10,而SLE患者外周血CD19+IgD+CD38hiB細(xì)胞能在I

6、L-21作用下擴(kuò)增,但沒有IL-10的分泌。
　　 結(jié)論:對(duì)于SLE外周血B細(xì)胞,IL-21/IL-21R信號(hào)在數(shù)量和功能上存在明顯的異常,IL-21對(duì)B細(xì)胞功能的負(fù)向調(diào)節(jié)在SLE中幾乎全部喪失,而活化功能得以保存。在SLE患者B細(xì)胞上,IL-21對(duì)B細(xì)胞的活化、增殖、趨化等作用明顯不再受到是否存在BCR和CD40活化信號(hào)的制約。除IL-21對(duì)Akt的異常活化外,P13K/Akt信號(hào)通路本身的異?；罨赟LE的發(fā)生發(fā)展中可能更為