IL-21調(diào)控異常與系統(tǒng)性紅斑狼瘡.pdf

1、背景和目的：
　　 活化B細(xì)胞進(jìn)入生發(fā)中心(germinal center,GC)的明區(qū)接受抗原特異性濾泡輔助T細(xì)胞(follicular T helper cell Tfh)和濾泡樹(shù)突細(xì)胞(follicular dendritic cell,fDC)的篩選,是自身反應(yīng)性B細(xì)胞清除的重要機(jī)制之一。而在生發(fā)中心,B細(xì)胞從暗區(qū)遷移到明區(qū)需要下調(diào)CXCR4。IL21是生發(fā)中心Tfh分泌的重要的B細(xì)胞活化調(diào)節(jié)因子,IL-21參與小鼠脾B

2、細(xì)胞CXCR4的表達(dá)調(diào)控,且對(duì)沒(méi)有接受特異性BCR信號(hào)及T細(xì)胞輔助的B細(xì)胞,IL-21抑制其增殖和/或啟動(dòng)凋亡,可能是清除自身反應(yīng)性B細(xì)胞的重要機(jī)制。為了明確IL-21是否參與人B細(xì)胞上CXCR4和CXCR5的表達(dá)調(diào)控以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者B細(xì)胞CXCR4及CXCR5表達(dá)異常是否與IL21相關(guān),導(dǎo)致從GC的暗區(qū)遷移進(jìn)入明區(qū)以及自身反應(yīng)性B細(xì)胞清除異常,我們對(duì)IL21,C

3、D40L以及anti-IgM不同刺激條件SLE外周血B細(xì)胞表面CXCR4/5的變化進(jìn)行分析,并與健康對(duì)照(HC)進(jìn)行比較。為了研究SLE的B細(xì)胞是否存在Akt過(guò)度活化、以及IL21調(diào)控Akt信號(hào)通路異常,而導(dǎo)致IL21對(duì)CXCR4調(diào)控障礙,及對(duì)分化、存活調(diào)控作用異常,我們分析了IL21對(duì)SLE外周血B細(xì)胞pAkt、pStat3的作用、及對(duì)B細(xì)胞分化、存活的影響,并與HC比較,并應(yīng)用PI3K阻斷劑LY294002阻斷病人B細(xì)胞異?；罨腁

4、kt,觀察在SLE中IL21對(duì)B細(xì)胞的異常調(diào)控是否通過(guò)Akt過(guò)度磷酸化進(jìn)行。為了進(jìn)一步研究IL21對(duì)SLE的B細(xì)胞凋亡異常調(diào)控的可能機(jī)制,我們?cè)诖碳ず髮?duì)兩種受Akt通路調(diào)控的抗凋亡蛋白mcl1、flip的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。
　　 方法：
　　 SLE和HC外周血B細(xì)胞在control、IL21、anti—IgM+CD40L、anti-IgM+CD40L+IL21四個(gè)條件下培養(yǎng),3天后用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CXCR4、CXCR5表

5、達(dá)；20分鐘后測(cè)定胞內(nèi)pAkt、pStat3；6天后測(cè)定不同B細(xì)胞亞群的比例變化；2天后檢測(cè)凋亡率的差別。SLE的B細(xì)胞用LY294002阻斷后再刺激6天,檢測(cè)B細(xì)胞亞群的比例變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.anti-IgM+CD40L或IL21刺激明顯下調(diào)HC的B細(xì)胞表面CXCR4(p<0.0001及p=0.0096),但在SLE患者中不能明顯下調(diào)(p=0.2575及p=0.2361)
　　 2.IL21單用或

6、聯(lián)合anti-IgM+CD40L均可使HC及SLE外周血B細(xì)胞表面CXCR5及pStat3明顯上調(diào)(CXCR5:IL21單用,HC p=0.0263,SLE p=0.0605anti-IgM+CD40L+IL21,HC p=0.0264,SLE p=0.0214。pStat3:IL21單用,HC p=0.0153,SLE p=0.0634；anti—IgM+CD40L+IL21,HC p=0.0142,SLEp=0.0375)。LY29

7、4002阻斷后IL21仍可上調(diào)CXCR5；而AG490阻斷后IL21不能上調(diào)CXCR5。
　　 3.單獨(dú)IL21刺激20min可上調(diào)SLE外周血B細(xì)胞pAkt,對(duì)HC無(wú)明顯作用；anti-IgM+CD40L刺激可明顯上調(diào)HC外周血B細(xì)胞pAkt,加IL21可明顯抑制pAkt。而SLE pAkt上調(diào)幅度小,加IL21對(duì)pAkt無(wú)抑制作用。
　　 4.anti-IgM+CD40L刺激3天后,HC與SLE外周血B細(xì)胞mcl1、

8、flip表達(dá)顯著增高,SLE顯著高于HC(mcl1:,增加倍數(shù)HC1.97±1.91,SLE4.71±2.63,p=0.0060)。anti-IgM+CD40L聯(lián)合IL21,刺激3d胞內(nèi)mcl-1平均熒光強(qiáng)度,HC增加(p=0.0242)。SLE無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 5.IL21刺激外周血B細(xì)胞6天,IgD+CD38hi細(xì)胞群、CD27+CD38hi漿細(xì)胞、CD38+CD138+PC在HC中比例無(wú)明顯變化或減少,但在SLE中比例

9、增加。SLE外周血B細(xì)胞預(yù)先予LY294002處理,則IL21不能上調(diào)上述三群細(xì)胞比例。
　　 6.IL21刺激2d,促進(jìn)HC B細(xì)胞凋亡,抑制SLE B細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論：
　　 SLE的B細(xì)胞Akt過(guò)度活化,IL21對(duì)Akt通路調(diào)控異常,可能造成IL21或活化刺激不能有效下調(diào)SLE患者B細(xì)胞表面的CXCR-4；單獨(dú)IL21刺激可促進(jìn)SLE的外周血B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化,抑制凋亡。用LY294002抑制SLE