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文檔簡介
1、目的:構(gòu)建攜帶干擾癌基因EphA3的小干擾RNA慢病毒載體，并研究其對肝癌細胞7402的生長和遷徙的影響。
方法:構(gòu)建攜帶EphA3小干擾RNA的慢病毒載體質(zhì)粒并將其與外源EphA3表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至人胚腎細胞293T中，Western印跡檢測其干擾EphA3蛋白表達的效果。將pSIH-H1-ShRNA-1504及空載體分別與3種包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞，包裝成慢病毒lentivirus-1504及對照慢病毒。將所獲慢病毒分別
2、感染肝癌細胞7402，并加入 puromycin(嘌呤霉素)篩選，1周后將細胞收集。Western印跡檢測 EphA3蛋白的表達水平，然后分別應(yīng)用MTT實驗、平板克隆形成實驗、軟瓊脂克隆形成實驗以及劃痕實驗檢測敲低EphA3對肝癌細胞增殖能力、存活能力，惡性程度和遷移能力的影響。
結(jié)果:lentivirus-1504抑制了7402細胞EphA3的表達，敲低EphA3后抑制了7402細胞的增殖能力、存活能力、惡性程度和遷移能力。
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