應(yīng)用IVCT分析不同的環(huán)境對轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　肺腺癌腫瘤細(xì)胞在原位增殖并向周圍侵襲轉(zhuǎn)移，在轉(zhuǎn)移的過程中，微環(huán)境隨著區(qū)域的不同而改變，為了適應(yīng)多變的環(huán)境，腫瘤細(xì)胞的一些特征也隨之改變。因此，轉(zhuǎn)移肺腺癌腫瘤細(xì)胞除具有原位腫瘤細(xì)胞的特征外，還具有一些為適應(yīng)環(huán)境變化而獲得新的特征。但是，以往對這些細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)變化的分析多是基于傳統(tǒng)的組織固定方法，而這些方法常?？梢砸鹨恍┎豢杀苊獾膯栴}，如人為操作或是化學(xué)試劑可以造成局部的血管收縮，血供丟失進(jìn)而使組織缺氧。這些問題又往往影

2、響對結(jié)果的判斷以及分析，從而對結(jié)果的正確性產(chǎn)生影響?；铙w內(nèi)凍結(jié)技術(shù)(in vivo cryotechnique)，通過直接將液體冷凍劑傾倒在活體的動(dòng)物器官上從而有效的避免由于人為操作，化學(xué)試劑等所帶來的一些影響。
　　為了避免傳統(tǒng)的固定方法所帶來的問題以及更好地分析結(jié)果，采用IVCT固定組織進(jìn)而分析肺腺癌中轉(zhuǎn)移細(xì)胞在不同環(huán)境下的行為特征。
　　方法:
　　Lewis肺癌細(xì)胞的培養(yǎng);應(yīng)用培養(yǎng)好的Lewis細(xì)胞制作動(dòng)物模型

3、;采用IVCT處理動(dòng)物模型中的肺組織并將肺組織塊進(jìn)行石蠟包埋;將石蠟包埋的肺組織塊切片染色，觀察，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1.應(yīng)用浸泡固定然后脫水（immersion-fixation followed by dehydration）的方法制作的組織細(xì)胞標(biāo)本呈現(xiàn)出血管受損，細(xì)胞皺縮，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞質(zhì)密度增加，核深染等問題;應(yīng)用IVCT制作的組織細(xì)胞標(biāo)本中，細(xì)胞形態(tài)以及內(nèi)部結(jié)構(gòu)如細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核等清晰完整。
　

4、　2.在血管周圍的原位肺腺癌腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞都表達(dá)HIF-1α（缺氧誘導(dǎo)因子-1α），但在壞死區(qū)域HIF-1α陰性，且離血管越遠(yuǎn)HIF-1α信號越強(qiáng)。
　　3.在縱隔淋巴結(jié)中，皮質(zhì)淋巴竇和邊緣竇中可見大量流動(dòng)的腫瘤細(xì)胞，且HIF-1α呈現(xiàn)陰性。但是在淋巴濾泡中可見少量腫瘤細(xì)胞，并未有腫瘤的形成，且在該區(qū)域腫瘤細(xì)胞HIF-1α也呈現(xiàn)陰性。
　　4.在原位腫瘤中，腫瘤組織對周圍正常肺組織產(chǎn)生嚴(yán)重的擠壓，正常組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)

5、重。在轉(zhuǎn)移腫瘤中，腫瘤組織亦對周圍正常脂肪細(xì)胞產(chǎn)生擠壓，但是脂肪細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見，并未遭到嚴(yán)重的破壞，且相比原位腫瘤，其擠壓程度也較輕。
　　5.在轉(zhuǎn)移腫瘤中，漿細(xì)胞多在血管周圍聚集，其中IgM陽性細(xì)胞數(shù)量最多，IgG-Fc陽性細(xì)胞其次，IgA陽性細(xì)胞最少。
　　結(jié)論:
　　1.通過和傳統(tǒng)的固定方法比較，IVCT可以使組織細(xì)胞呈現(xiàn)出更完整清晰的細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，還可以防止細(xì)胞收縮過度而影響對結(jié)果的分析，是一種較為實(shí)用

6、的組織固定方法。
　　2.轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞和原位的腫瘤細(xì)胞一樣，在血管周圍多呈現(xiàn)出缺氧狀態(tài)，由于腫瘤細(xì)胞生長速度過快，離血管較遠(yuǎn)的腫瘤細(xì)胞得不到充足氧分供給，往往形成經(jīng)典的“血管-缺氧區(qū)域-壞死區(qū)域”結(jié)構(gòu)區(qū)域。缺氧與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
　　3.由于環(huán)境的改變或是腫瘤細(xì)胞自身成長以及轉(zhuǎn)移的需要，在縱隔淋巴結(jié)中的腫瘤細(xì)胞不需要通過自身表達(dá)HIF-1α來適應(yīng)環(huán)境或是滿足自身的需求?？v隔淋巴結(jié)對于肺腺癌來說，是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)移途徑