RACK1對肺腺癌細胞侵襲轉移的影響及臨床意義.pdf

1、目的:RACK1(receptor for activated C kinase1)作為激活的蛋白激酶C受體，可與PKC(protein kinase C)結合調控多種細胞功能如細胞擴散，細胞骨架組裝、細胞粘附和細胞遷移等，近年來研究顯示其與腫瘤侵襲轉移密切相關。本研究觀察沉默RACK1后，肺腺癌細胞A549侵襲轉移能力變化;初步探討RACK1對肺腺癌侵襲轉移作用的機制;并檢測分析肺腺癌組織RACK1表達與肺腺癌臨床病理特征及預后之間的

2、關系。
　　 方法:構建質粒后轉染肺腺癌A549細胞，通過real-time PCR，RT-PCR,以及Western-blot，篩選高效并穩(wěn)定敲低RACK1的肺腺癌A549細胞株;應用Transwell試驗，劃痕愈合試驗以及細胞骨架免疫熒光檢測穩(wěn)定敲低RACK1的肺腺癌A549細胞株的侵襲和轉移能力及細胞形態(tài)的變化;通過Western-blot法檢測A549vector和A549RACK1-shRNA1兩組細胞中與侵襲轉移相關

3、的蛋白Snail、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin以及MMP-9的蛋白表達情況;應用免疫組化研究RACK1在92例肺腺癌組織中的表達情況，依據Shimizu評分法將其分為RACK1高表達組與RACK1低表達組，應用Kaplan-Meier生存分析并采用Log-rank檢驗兩組間的統(tǒng)計學差異，應用Spearman相關性分析和建立Cox比例風險回歸模型分析RACK1表達水平與肺腺癌臨床病理特征及預后的關系。

4、>　　 結果:
　　 1.篩選出穩(wěn)定轉染shRNA1質粒并高效敲低RACK1的肺腺癌A549細胞株;
　　 2.Transwell侵襲和遷移試驗以及劃痕愈合試驗均表明A549RACK1-shRNA1（實驗組）細胞較A549vector組（對照組）細胞的侵襲和遷移能力明顯減弱;
　　 3.觀察細胞免疫熒光可見實驗組細胞形態(tài)皺縮，細胞骨架紊亂;
　　 4.敲低RACK1后肺腺癌細胞中蛋白表達水平改變，其中實

5、驗組細胞中Snail、N-Cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白表達較對照組顯著下調;實驗組細胞中E-Cadherin蛋白表達較對照組顯著上調;
　　 5.臨床研究的結果顯示，在無瘤生存分析和總體生存分析中，RACK1高表達組中位生存時間均顯著短于低表達組;相關性分析中RACK1高表達與肺腺癌淋巴結轉移及TNM分期密切相關;而單因素和多因素分析中，RACK1高表達是肺腺癌不良預后的獨立預測因素。
　　 結論: