2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述:
  第一部分 C-反應(yīng)蛋白促進(jìn)LDL跨內(nèi)皮細(xì)胞穿胞的機(jī)制及其在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生中的作用
  目的:動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)是許多心、腦血管病的共同發(fā)病學(xué)基礎(chǔ),其發(fā)病機(jī)制尚為完全闡明。眾多AS發(fā)病學(xué)說中,廣受關(guān)注的是脂蛋白滯留反應(yīng)學(xué)說。該學(xué)說認(rèn)為,低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL)在血管內(nèi)膜下的沉積是AS發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)。研究發(fā)

2、現(xiàn),LDL通過穿胞(Transcytosis)作用進(jìn)入并滯留于血管內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cells, ECs)下。C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)是一種重要的炎癥因子,與AS的發(fā)生關(guān)系密切。CRP能否可以通過促進(jìn)LDL在ECs中穿胞并促進(jìn)AS發(fā)生尚不清楚。本部分旨在研究CRP對LDL在ECs中穿胞的影響及其相關(guān)機(jī)制以及其在AS發(fā)生中的作用。
  方法:通過LDL體外穿胞模型檢測穿胞抑制劑、

3、活性氧(Reactive oxygen species, ROS)相關(guān)抑制劑以及蛋白激酶抑制劑對CRP引起的LDL穿胞的影響;不連續(xù)密度梯度超速離心法提取脂筏檢測CRP對胞吞相關(guān)蛋白(Caveolin-1、Cavin-1、Dynamin-2)及胞吐相關(guān)蛋白(NSF、α-SNAP、VAMP3/Cellubrevin、Syntaxin4)表達(dá)的影響;DCF(Dichlorofluorescein)熒光法檢測CRP對細(xì)胞內(nèi)ROS生成的影響;E

4、LISA法檢測CRP對蛋白激酶 C(Protein kinase C, PKC)和Src激酶活性的影響;激光共聚焦成像觀察ECs對LDL的內(nèi)吞攝取及LDL在人臍靜脈血管壁的滯留情況;在ApoE-/-小鼠AS模型中,通過油紅O染色觀察主動(dòng)脈根部的脂質(zhì)沉積情況,免疫組化檢測斑塊中早期AS標(biāo)志分子CD154的表達(dá)變化。
  結(jié)果:通過LDL體外穿胞模型發(fā)現(xiàn),CRP能夠明顯促進(jìn)LDL跨內(nèi)皮細(xì)胞穿胞,穿胞抑制劑N-ethylmaleimid

5、e(NEM)和Methyl-β-cyclodextrin(MβCD)、ROS生成抑制劑Diphenylene iodonium(DPI)、巰基保護(hù)劑Dithiothreitol(DTT)、PKC抑制劑Bisindolylmaleimide I(BIM I)和Src激酶抑制劑PP2會(huì)明顯抑制CRP引起的LDL穿胞;CRP可以促進(jìn)脂筏中穿胞相關(guān)分子(Caveolin-1、Cavin-1、Dynamin-2、NSF、α-SNAP、VAMP3/

6、Cellubrevin、Syntaxin4)表達(dá),并可被上述抑制劑不同程度抑制;同時(shí)發(fā)現(xiàn),外源性ROS(H2O2)也能促進(jìn)LDL跨內(nèi)皮細(xì)胞穿胞。DCF法檢測發(fā)現(xiàn)CRP可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生ROS,DPI和DTT能拮抗CRP的促ROS產(chǎn)生作用。ELISA方法檢測發(fā)現(xiàn)CRP能上調(diào)PKC和Src活性;激光共聚焦檢測發(fā)現(xiàn),穿胞抑制劑MβCD、NEM, ROS相關(guān)抑制劑DPI、DTT和激酶抑制劑BIM I、PP2均能不同程度減少CRP引起的促ECs

7、攝取LDL顆粒及促LDL在血管內(nèi)皮下的滯留;在ApoE-/-小鼠AS模型中,發(fā)現(xiàn)CRP促脂質(zhì)沉積,促進(jìn)早期AS斑塊形成,MβCD、NEM、DTT、BIMI和PP2均可不同程度抑制CRP促脂質(zhì)沉積作用;免疫組化顯示CRP可以促進(jìn)斑塊區(qū)域AS早期標(biāo)志物CD40配體-CD154表達(dá),MβCD、NEM、DTT、BIMI和PP2均能拮抗CRP的作用。
  結(jié)論:CRP可以促進(jìn)LDL跨ECs穿胞,促進(jìn)LDL在血管內(nèi)皮下沉積,加速早期AS形成。

8、相關(guān)機(jī)制可能是,CRP促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生ROS,繼而激活PKC, Src激酶,激活Caveolae及SNARE信號通路,繼而促進(jìn)LDL穿過ECs,在血管內(nèi)皮下沉積滯留。
  第二部分 NLRP3炎癥小體在CRP促LDL跨內(nèi)皮細(xì)胞穿胞中的作用
  目的:炎癥小體(Inflammasome)是一種調(diào)控IL-1β產(chǎn)生的大分子蛋白復(fù)合體,在動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。其中,NLRP3(Nucleotide-binding

9、domain and leucine-rich repeat protein3)是目前研究最為深入和廣泛的炎癥小體類型。研究發(fā)現(xiàn),NLRP3可作為血漿中CRP水平的預(yù)測因子。本部分旨在探討CRP是否可以激活內(nèi)皮細(xì)胞中NLRP3炎癥小體及NLRP3炎癥小體對CRP促LDL跨內(nèi)皮細(xì)胞穿胞的影響,并進(jìn)一步研究了CRP促NLRP3炎癥小體活化的相關(guān)分子機(jī)制。
  方法:ECs轉(zhuǎn)染NLRP3 siRNA或給予Caspase-1抑制劑后用We

10、stern blot方法觀察CRP對NLRP3炎癥小體的作用;ECs轉(zhuǎn)染NLRP3 siRNA或給予Caspase-1抑制劑后,體外穿胞模型檢測炎癥小體對CRP促LDL跨內(nèi)皮細(xì)胞穿胞的影響;通過基于ELISA的轉(zhuǎn)錄因子活性測定方法檢測CRP對NF-κB活性的影響;給予不同抑制劑處理后用Western blot方法檢測CRP對NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白(NLRP3, Pro-caspase-1, Caspase-1, Pro-IL-1β,

11、IL-1β)表達(dá)的影響。
  結(jié)果:CRP能激活內(nèi)皮細(xì)胞NLRP3炎癥小體,siRNA沉默NLRP3基因或者Caspase-1抑制劑(Z-VAD-FMK)抑制Caspase-1活性后,能顯著降低CRP引起的NLRP3炎癥小體激活相關(guān)蛋白(NLRP3、Caspase-1、IL-1β)的表達(dá)水平;體外穿胞模型檢測發(fā)現(xiàn)NLRP3 siRNA及 Z-VAD-FMK能明顯抑制CRP促LDL穿胞的作用;通過基于 ELISA的轉(zhuǎn)錄因子活性測定方

12、法檢測發(fā)現(xiàn),CRP能上調(diào)NF-κB活性,NF-κB抑制劑Bay-11-7082(Bay)和FcγR封閉性抗體(CD32Ab、CD64Ab)可以拮抗CRP促NF-κB活化作用;Western blot方法提示FcγR封閉性抗體、NF-κB抑制劑、ROS相關(guān)抑制劑(DPI、DTT)、Caspase-1抑制劑、P2X7R抑制劑(oATP)、廣譜半胱氨酸蛋白酶抑制劑(E-64d)均能不同程度抑制CRP上調(diào)NLRP3炎癥小體激活相關(guān)蛋白分子(NL

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