aFGF和HGF在肝干細胞分化成熟中的作用及對其耐受低溫能力的影響.pdf

1、研究背景:肝細胞移植術(shù)的研究使其成為治療肝臟疾病的新途徑.然而肝細胞雖然在體內(nèi)有著強大的功能和增殖能力,但在體外培養(yǎng)的情況下,尤其在凍存復(fù)蘇后,其代償增殖能力大大降低,且短期內(nèi)就可喪失許多重要的生物活性,從而失去移植意義.肝干細胞作為肝細胞的前體細胞具有強大的增殖能力和分化能力.1998年Thomson和Gearhart分別報道人體胚胎干細胞和胚胎生殖干細胞的建系成功,啟迪和激起人們對干細胞及其定向分化的研究熱情.這一科技成就將使干細胞

2、的研究成為新近最具發(fā)展和應(yīng)用前景的領(lǐng)域,而肝干細胞工程也將成為一個新興的肝細胞移植研究領(lǐng)域.目的:研究酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)及肝細胞生長因子(HGF)對胎肝干細胞增殖和分化的影響;鑒定胎肝細胞的干細胞特性;探討肝干細胞的生物學(xué)特征及深低溫保存后其活力與成熟度的關(guān)系,為肝細胞移植和生物人工肝探索一種有效的細胞來源.方法:采用膠原酶消化法分離胎齡13天的SD大鼠胚胎肝臟細胞,分別接種于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組細胞培養(yǎng)瓶中,光鏡下觀察體外

3、培養(yǎng)中胎肝細胞的形態(tài).免疫細胞化學(xué)法鑒定細胞角質(zhì)素—19(CK-19)的表達.并在培養(yǎng)相同時間后,放免分析法測定培養(yǎng)上清液中AFP及ALB水平.取培養(yǎng)3天后的各組胎肝細胞于液氮中深低溫保存1周后,將之取出復(fù)蘇,MTT法測定細胞活力.結(jié)果:Ⅱ組(含aFGF)、Ⅲ組(含HGF)及Ⅳ組(含aFGF和HGF)分別與對照組(Ⅰ組)比較,在相同培養(yǎng)時間的培養(yǎng)上清液中AFP的含量均較少,而ALB的含量均較多,且均有顯著性差異(P<0.05);Ⅱ組和Ⅲ

4、組相同培養(yǎng)時間的培養(yǎng)上清液中AFP及ALB的含量均無顯著性差異(P>0.05);而Ⅳ組分別與Ⅱ組和Ⅲ組比較,在相同培養(yǎng)時間的培養(yǎng)上清液中AFP的含量均較少,而ALB的含量均較多,也均有顯著性差異(P<0.05).免疫細胞化學(xué)染色顯示:大鼠胎肝細胞大量表達CK-19分子均在70％以上.凍存復(fù)蘇后細胞回收率及活率測定顯示:Ⅱ組、Ⅲ組及Ⅳ組的回收率及活率均低于Ⅰ組,有顯著性差異(P<0.05);Ⅱ組、Ⅲ組及Ⅳ組間兩兩比較無顯著性差異(P>0.