TB患者NKT細(xì)胞數(shù)量與功能的研究及α-GalCer對Mtb感染后小鼠體內(nèi)NKT細(xì)胞功能的影響.pdf

1、結(jié)核桿菌是導(dǎo)致人類死亡的重要病原體之一，全世界每年大約有800萬新發(fā)活動性結(jié)核，200萬因為結(jié)核病而死亡，1/3的人口被結(jié)核桿菌感染，其中5-10％發(fā)展為活動性結(jié)核，這個比例在HIV感染者中更高。已經(jīng)成為發(fā)展中國家的重要公共衛(wèi)生問題。BCG疫苗被證明是有效的，它可以預(yù)防兒童時期的重癥結(jié)核，比如結(jié)核性腦膜炎和粟粒性結(jié)核，其有效率為1/3435和1/9314。因此在TB高發(fā)區(qū)，BCG疫苗在小兒出生后即得到接種。但是大量研究表明，BCG疫苗對

2、于肺結(jié)核的預(yù)防效果受到質(zhì)疑，因此迫切需要更深入的探討機(jī)體結(jié)核桿菌的免疫應(yīng)答以便開發(fā)出新的疫苗。
　　NKT細(xì)胞是是一類T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)亞群，其數(shù)量和功能與自身免疫疾病和感染性疾病密切相關(guān)。NKT細(xì)胞作為高效的免疫效應(yīng)和調(diào)節(jié)細(xì)胞，其功能多樣，但最重要的功能是抑制Mtb以及其他致病性分支桿菌。在NKT細(xì)胞的胞漿中存在已預(yù)先存在的IFN-γmRNA，如NKT細(xì)胞表面的受體接受刺激信號后，則可以立即分泌IFN-γ，其分泌水平是CD4+細(xì)胞分

3、泌水平的200倍。體內(nèi)NKT細(xì)胞受到刺激后可以誘導(dǎo)DC細(xì)胞的成熟并加快遞呈可溶性抗原，從而促使CD8+T細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒性作用。Mtb感染小鼠或者分支桿菌細(xì)胞壁提取物注射入小鼠體內(nèi)可以誘導(dǎo)NKT細(xì)胞對Mtb產(chǎn)生強(qiáng)烈應(yīng)答，例如，將牛BCG注射入小鼠后的8天，肺組織中的NKT細(xì)胞比原先增長6倍;感染后30天，NKT細(xì)胞數(shù)量才開始下降，并且其表面的NK1.1表達(dá)也同時下調(diào)。
　　以往研究可知NKT細(xì)胞識別脂質(zhì)抗原，包括結(jié)核桿菌的脂質(zhì)，在小

4、鼠實驗中已被證明能夠成功誘導(dǎo)保護(hù)性免疫，有實驗證實將結(jié)核桿菌的細(xì)胞壁脫蛋白以后，再注入小鼠體內(nèi)，NKT細(xì)胞可以協(xié)助肉芽腫的形成。NKT細(xì)胞不僅能針對宿主結(jié)核桿菌感染產(chǎn)生保護(hù)力，甚至對HIV也具有殺傷活力，而研究證實HIV感染后，將大大增加機(jī)體對外源性和內(nèi)源性結(jié)核桿菌的感染。因此在如何激活或者強(qiáng)化NKT細(xì)胞的活性是一個重要課題，這也是本研究著重解決的問題，同時也是本研究的創(chuàng)新所在，因此本研究分為兩部分:
　　第一部分 研究TB患者體

5、內(nèi)NKT細(xì)胞的數(shù)量與功能
　　在此本部分中，將探討TB患者與健康志愿者體內(nèi)NKT細(xì)胞的數(shù)量及其功能的差異，其判斷依據(jù)足NKT細(xì)胞的百分比、IL-4和IFN-γ胞內(nèi)細(xì)胞因子的分泌量。
　　通過本部分研究，發(fā)現(xiàn)對于活動性TB患者來說，其體內(nèi)的NKT細(xì)胞的百分比相對于健康對照者來說是顯著下降的，
　　第二部分 α-GalCer對結(jié)核桿菌感染Balb/c小鼠體內(nèi)NKT細(xì)胞功能的影響，研究結(jié)果顯示:健康志愿者體內(nèi)NKT細(xì)胞在受到

6、刺激后，其IFN-γ分泌量上升，IL-4分泌未出現(xiàn)明顯改變，TB患者體內(nèi)NKT細(xì)胞在受到刺激后，其IFN-γ分泌量上升，IL-4分泌未出現(xiàn)明顯改變，IL-4分泌未出現(xiàn)明顯改變，健康志愿者體內(nèi)NKT細(xì)胞數(shù)量顯著高于TB患者體內(nèi)NKT細(xì)胞的數(shù)量，在NKT細(xì)胞功能上，TB患者顯著低于健康志愿者，二者具有統(tǒng)計學(xué)差異，在受到藥物刺激后，患者體內(nèi)IFN-γ陽性，tetramer+的NKT細(xì)胞顯著高于健康對照組，IL-4陽性，tetramer+的NK

7、T細(xì)胞顯著低于健康對照組，T-SPOT對于TB的臨床診斷具有重要指導(dǎo)作用。
　　研究發(fā)現(xiàn)在不同給藥劑量，不同給藥途徑的情況下，α-GalCer活化NKT細(xì)胞的能力存在顯著差異。在尾靜脈給藥途徑中，合適給藥劑量為1000ng/10ul;在滴鼻給藥途徑中，發(fā)現(xiàn)各劑量組之間無顯著性差異。在給藥劑量確定的情況下（1000ng/100ul靜脈給藥，1000ng/10ul滴鼻）靜脈給藥途徑時，血清，支氣管肺泡灌洗液，肺勻漿液中IFN-γ分泌量

8、有顯著差異，血清中為最高:采用滴鼻給藥途徑時，血清，支氣管肺泡灌洗液，肺勻漿液中IFN-γ分泌量有顯著差異，肺勻漿液中為最高。
　　通過本研究發(fā)現(xiàn):無論何種給藥方式，α-GalCer單獨用藥作用都不明顯;首次應(yīng)用α-GalCer聯(lián)合RFP給藥，結(jié)果顯示該藥物組合可治療Mtb感染小鼠，與RFP單獨給藥組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異，靜脈給藥作用更明顯;本研究結(jié)果提示:在治療后肺局部的各種炎癥因子（Th1細(xì)胞因子和Th2細(xì)胞因子）總體趨勢是下降