利用家系相關(guān)性分析方法探討原發(fā)性膽汁性肝硬化的基因易感性.pdf

1、背景:
　　原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一種自身免疫性肝臟疾病,主要是由免疫紊亂介導(dǎo)，引起慢性進(jìn)行性非化膿性膽管炎，以肝內(nèi)小膽管損傷和匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤為主要特征，進(jìn)而發(fā)生肝內(nèi)膽汁淤積，最終導(dǎo)致肝纖維化和肝硬化。隨著人們對PBC的認(rèn)識和診療水平的提高及自身抗體檢測技術(shù)的廣泛應(yīng)用，PBC發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。然而大多數(shù)病人在早期無癥狀，發(fā)現(xiàn)時已屬肝硬化的晚期，因此早期診斷早期治

2、療對PBC患者具有非常重要的意義。但是PBC的發(fā)病機制尚不明確，近年來流行病學(xué)調(diào)查研究顯示PBC發(fā)病呈明顯的家族聚集現(xiàn)象。
　　不同國家流行病學(xué)研究顯示PBC一級親屬的PBC患病率在1.0％-7.1％之間，而正常群體PBC患病率僅為0.001％-0.2％，一級親屬PBC的患病率明顯高于正常人群的PBC患病率；PBC在同卵雙胞胎中的共患病率高達(dá)63％；PBC患者一級親屬其中有61％發(fā)現(xiàn)有免疫異常，有14％合并有其他自身免疫性疾病。這

3、三方面的資料說明PBC發(fā)病具有明顯的家族聚集現(xiàn)象，提示基因易感性與PBC的發(fā)病密切相關(guān)。目前主要認(rèn)為其發(fā)病機制是基因易感性與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。
　　同時，PBC發(fā)病機制與免疫調(diào)節(jié)紊亂密切相關(guān)，尤其與T細(xì)胞陽性選擇及Th1細(xì)胞增殖、分化異常甚為密切，其信號通路包括IL-12信號通路、Th1分化信號通路等。其中參與T細(xì)胞增殖、陽性選擇的分子包括CTLA-4、PTPN22以及MHC類分子。參與Th1細(xì)胞分化的分子包括IL-12、S

4、TAT4、IRF5、INF-γ及Tyk2。
　　目的:
　　利用家系相關(guān)性分析方法探討原發(fā)性膽汁性肝硬化的基因易感性。主要針對免疫調(diào)節(jié)相關(guān)基因即與Th1細(xì)胞分化信號通路密切相關(guān)的單核甘酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位點進(jìn)行研究，尋找與PBC發(fā)病密切相關(guān)的基因，為研究PBC的發(fā)病機制提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　收集PBC家系（包括PBC患者及其一級親屬）血液

5、樣本，部分用于收集血清，部分用于DNA提取，儲存并建立血清庫及DNA庫。用間接免疫熒光法、免疫印跡法對這些樣本的血清庫進(jìn)行自身抗體的檢測。利用芯片SNP的方法對DNA庫基因SNP位點易感性進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果:
　　共收集80個家系的血液樣本300份，結(jié)合臨床診斷及實驗室檢測，共確診94例PBC患者與206例正常的一級親屬。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，80個PBC家系中，10個家系的一級親屬中診斷有PBC患者，得出PBC家系患病率為12

6、.5％，明顯高于正常群體PBC患病率。
　　在所有一級親屬中，發(fā)現(xiàn)14例在本實驗研究中自身抗體檢測異常，均為抗核抗體（antinuclear antibody,ANA）陽性，且間接免疫熒光結(jié)果表現(xiàn)為抗線粒體抗體(antimitochondrial antibody,AMA)陽性,并且免疫印跡法測定ANA譜為抗線粒體抗體M2型（antimitochondrial antibody M2,AMA-M2）陽性在＋～＋＋＋＋。初步篩查認(rèn)為

7、此14例一級親屬為可疑PBC患者，結(jié)合進(jìn)一步臨床診斷，最終均確診為PBC患者。
　　利用家系相關(guān)性分析方法，對IL-12RB2基因上三個SNP位點(rs3790567,rs3790565,rs6679356)和STAT4基因上三個SNP位點(rs6748358,rs16833239,rs7574865)進(jìn)行分析。得出位于IL-12RB2上的rs3790567位點和位于STAT4上的rs6748358位點與PBC密切相關(guān)。