攜帶IRES序列的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及表達(dá).pdf

1、分類號：R318學(xué)校代碼：10392學(xué)號：2004284福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文攜帶IRES序列的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)ConstructionandexpressionofadenoassociatedvirusvectorcontainingIRESsequence所在院(系)：第一臨床醫(yī)學(xué)院研究生：顏素彬?qū)W科(專業(yè))：眼科學(xué)導(dǎo)師：林發(fā)森教授朱益華副教授研究起止日期：2005年9月至2006年12月二零零七年三月攜帶IRE

2、S序列的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)摘要目的：構(gòu)建一種含內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(IRES)序列的腺相關(guān)病毒表達(dá)載體，用于簡便、快速地了解睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)，為進(jìn)一步探討CNTF對大鼠視網(wǎng)膜及視神經(jīng)的影響奠定基礎(chǔ)。方法：1采用PCR技術(shù)，在質(zhì)粒plRES中擴(kuò)增IRES序列，利用基因重組技術(shù)將IRES序列構(gòu)建到腺相關(guān)病毒載體pAAV—CNTFEGFP中。2重組質(zhì)粒pAAVcNT卜IREs—EGFP和兩種輔助質(zhì)粒pH

3、elper、pAAV—RC通過脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染AAV一293細(xì)胞，用熒光倒置顯微鏡檢測細(xì)胞中增強型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達(dá)。3采用RT—PCR方法檢測CNTF基因的表達(dá)。結(jié)果：1重組的p從vcNTF—IRES—EGFP質(zhì)粒經(jīng)PCR篩選、酶切及測序鑒定證實構(gòu)建成功。2在熒光倒置顯微鏡下觀察到增強型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達(dá)。3采用lit—PCR方法在轉(zhuǎn)染的AAV293細(xì)胞中觀察到CNTFeDNA的特異條帶。結(jié)論：IRES序列調(diào)控CN