葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78對肝癌細胞增殖、自噬及體外血管生成的影響.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探討GRP78siRNA干擾GRP78表達對體外培養(yǎng)的肝癌細胞株增殖、自噬和體外血管生成的影響及其作用機制，為探索有效抗腫瘤和抗腫瘤血管生成藥物提供新靶點與新思路。
　　方法：
　　1. GRP78最佳 siRNA篩選：設計合成 siRNA轉染體外培養(yǎng)肝癌細胞株MHCC97H，通過Western blot分析篩選出最佳干擾片段；
　　2.實驗分三組，即空白對照組（control group）

2、，陰性對照組（siControl group）和實驗組（siGRP78 group）；
　　3. MTT法檢測下調(diào)GRP78表達后肝癌細胞增殖活力變化；
　　4.流式細胞儀檢測下調(diào) GRP78表達后對肝癌細胞株 huh7和SMMC7721細胞周期分布的影響；
　　5. Western blot分析下調(diào)肝癌細胞GRP78表達后各組LC3-Ⅱ、CCND1、AKT、p-AKT蛋白表達變化；
　　6.收集轉染肝癌細胞培養(yǎng)

3、基上清行體外血管生成實驗：HUEVC平板克隆形成和劃痕遷移檢測GRP78對腫瘤微環(huán)境中血管生成的影響。
　　結果：
　　1. GRP78siRNA特異性下調(diào)肝癌細胞GRP78表達；
　　2.下調(diào)GRP78表達可抑制肝癌細胞增殖；
　　3.下調(diào)GRP78表達可誘導肝癌細胞阻滯在G0/G1期；
　　4.下調(diào)GRP78表達可顯著降低肝癌細胞周期蛋白CCND1的表達；
　　5.下調(diào)GRP78表達可顯著降低肝癌

4、細胞自噬標志蛋白LC3-Ⅱ的表達；
　　6.下調(diào)GRP78表達可顯著降低肝癌細胞AKT磷酸化水平；
　　7.下調(diào)GRP78表達可顯著抑制體外血管生成：HUEVC平板克隆形成和劃痕遷移。
　　結論：
　　1.GRP78siRNA轉染肝癌細胞能夠特異性下調(diào) GRP78表達，并抑制細胞增殖，誘導huh7和SMMC7721細胞周期阻滯；
　　2.下調(diào)huh7和SMMC7721細胞GRP78后可能通過影響PI3K/A