2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分
   目的:研究TGF-β1對同種反應(yīng)性T細(xì)胞增殖能力及CD25表達水平的影響。
   方法:以絲裂霉素處理的Balb/C(H-2d)裸鼠脾細(xì)胞為刺激細(xì)胞,CFDA-SE標(biāo)記的C57BL/6(H-2b)小鼠的T細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞進行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(mixed lymphocytes culture,MLC)。分別設(shè)立對照組(TGF-β1 0ng/ml)、低濃度組(TGF-β1 1.0ng/ml)、中等濃度組(TG

2、F-β1 5.0ng/ml)和高濃度組(TGF-β1 10.0ng/ml)。MLC結(jié)束后利用Alamar Blue法檢測T細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀(FACS)檢測CD3、CD25表達水平。同時設(shè)立IL-2組(TGF-β1 5.0ng/ml+外源性IL-2 100u/ml),以觀測其對TGF-β1生物學(xué)效應(yīng)的影響。
   結(jié)果:TGF-β1可明顯降低同種抗原活化T細(xì)胞的增殖反應(yīng)強度(對照組 vs 低濃度組,p<0.05),而且隨著

3、TGF-β1劑量加大,免疫抑制能力增強(低濃度組 vs 中濃度組,p<0.05)。TGF-β1在抑制T細(xì)胞增殖的同時,也使得CD25+T細(xì)胞比例上調(diào)(對照組 vs 低濃度組,p<0.05),但并無明顯的劑量依耐性。加入外源性IL-2后,T細(xì)胞增殖活性增強(IL-2組 vs 中濃度組,p<0.05),同時CD25+T細(xì)胞比例降低(IL-2組 vs 中濃度組,p<0.05)。
   結(jié)論:TGF-β1可明顯抑制同種抗原活化T細(xì)胞的增

4、殖,并使CD25+T細(xì)胞表達增加,而外源性IL-2則可逆轉(zhuǎn)TGF-β1的免疫抑制功能,下調(diào)CD25+T細(xì)胞比例,說明TGF-β1的生物學(xué)效應(yīng)要受到外源性IL-2的影響。
   第二部分
   目的:研究TGF-β1誘導(dǎo)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的能力及其相關(guān)機理。
   方法:1、利用絲裂霉素處理的Balb/C裸鼠脾細(xì)胞刺激C57BL/6小鼠T細(xì)胞,同時給予TGF-β1予以干預(yù)(按TGF-β1劑量不同設(shè)立

5、4組:對照組,低濃度組,中濃度組和高濃度組),共同培養(yǎng)5天后,用流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+T細(xì)胞比例;同時用RT-PCR檢測培養(yǎng)細(xì)胞中Foxp3的表達水平。2、在第一部分實驗基礎(chǔ)上,通過MACS分離獲取C57BL/6小鼠CD4+CD25-T細(xì)胞,用同種抗原刺激后,給予TGF-β1干預(yù),培養(yǎng)5天后分離CD4+CD25+T細(xì)胞,利用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)檢測其抑制淋巴細(xì)胞增殖的能力。
   結(jié)果:T細(xì)胞經(jīng)同種抗原刺激后,在中、高

6、濃度TGF-β1誘導(dǎo)下CD4+CD25+T細(xì)胞比例均明顯升高,F(xiàn)oxp3的表達水平也相應(yīng)增加,與對照組相比有顯著性差異(p<0.05)。TGF-β1可直接誘導(dǎo)CD4+CD25-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+T細(xì)胞,轉(zhuǎn)化后的CD4+CD25+T細(xì)胞能有效抑制淋巴細(xì)胞增殖。
   結(jié)論:TGF-β1可誘導(dǎo)CD4+CD25-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+Treg,促進其表達Foxp3,并能抑制淋巴細(xì)胞增殖。
   第三部分

7、r>   目的:利用TGF-β1體外誘導(dǎo)na?ve T細(xì)胞分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,通過體內(nèi)輸注延長小鼠皮膚移植物存活時間,并研究其相關(guān)機理。
   方法:根據(jù)誘導(dǎo)條件不同分為三組:對照組(加入IL-2培養(yǎng)的C57BL/6小鼠T細(xì)胞)、MLR組(經(jīng)同種抗原刺激活化的C57BL/6小鼠T細(xì)胞)和TGF-β組(經(jīng)同種抗原刺激活化的C57BL/6小鼠T細(xì)胞,同時加入5.0ng/ml TGF-β1誘導(dǎo))。利用FACS檢測CD4+CD25+T

8、細(xì)胞比例,并用RT-PCR檢測Foxp3的表達水平。建立小鼠皮膚移植模型,并于0、1、2和3d輸注上述細(xì)胞,觀察皮膚移植物存活時間。術(shù)后第9天,取部分受鼠行移植物病理檢測,用FACS檢測脾臟中Th1、Th2和CD4+CD25+Treg比例,并用Alamar Blue法檢測淋巴細(xì)胞增殖能力。
   結(jié)果:TGF-β組中CD4+CD25+T細(xì)胞比例高于對照組和MLR組(p<0.05),且其高表達Foxp3。將培養(yǎng)的細(xì)胞輸注給受鼠后發(fā)

9、現(xiàn),輸注MLR組細(xì)胞的受鼠其移植物平均存活時間(mean survival time,MST)為(9.4±1.3)d,低于對照組(p<0.05);而輸注TGF-β組細(xì)胞小鼠MST為(22.8±1.9)d,較對照組和MLR組明顯延長(p<0.05)。病理檢測亦顯示TGF-β組受鼠移植物結(jié)構(gòu)完整,無明顯淋巴細(xì)胞浸潤。FACS結(jié)果顯示TGF-β組小鼠體內(nèi)Th1細(xì)胞(CD4+TIM-3+)比例低于對照組和MLR組(p<0.05),而Th2細(xì)胞(

10、CD4+TIM-1+)比例則與MLR組類似(p>0.05),但低于對照組(p<0.05);而且TGF-β組中CD4+CD25+Treg比例明顯高于對照組和MLR組(p<0.05)。用Alamar Blue法檢測受鼠外周淋巴細(xì)胞增殖活性顯示,TGF-β組受鼠淋巴細(xì)胞增殖能力被明顯抑制,低于對照組(p<0.05)。
   結(jié)論:TGF-β1可誘導(dǎo)T細(xì)胞分化為具有抑制能力的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,將誘導(dǎo)后的細(xì)胞進行過繼輸注可使小鼠體內(nèi)CD4+C

11、D25+Treg比例升高,同時抑制Th1和Th2細(xì)胞分化擴增,并使得外周淋巴細(xì)胞增殖能力減弱,從而延長小鼠皮膚移植物存活時間。
   第四部分
   目的:研究TIM-3-TIM-3L通路在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫抑制效應(yīng)中的作用。
   方法:用MACS從成年C57BL/6分離獲取天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(natural Treg,nTreg),并利用TGF-β1誘導(dǎo)na?ve T細(xì)胞分化為誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(induced

12、Treg,iTreg),隨后通過RT-PCR檢測其表達Foxp3和TIM-3L的水平,及其對淋巴細(xì)胞增殖的抑制能力。使用TIM-3融合蛋白(TIM-3.Ig)和anti-TIM-3處理nTreg和iTreg,對TIM-3-TIM-3L通路進行阻斷,隨后利用MLC體系檢測其免疫抑制能力的變化情況。
   結(jié)果:分離獲取的nTreg和iTreg均可表達Foxp3。TIM-3L(galectin-9)在脾細(xì)胞高表達,同時在nTreg和

13、iTreg也檢測到有g(shù)alectin-9表達,但表達水平低于脾細(xì)胞(p<0.05)。用TIM-3.Ig對nTreg和iTreg進行干預(yù)后發(fā)現(xiàn),nTreg和iTreg抑制淋巴細(xì)胞增殖的能力部分減弱,與未干預(yù)組差異顯著(p<0.05),但nTreg和iTreg之間無差異(p>0.05);而用anti-TIM-3處理nTreg和iTreg后并未明顯減弱其抑制淋巴細(xì)胞增殖的能力(p>0.05)。
   結(jié)論:TGF-β1可誘導(dǎo)iTreg

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