基于納米探針技術(shù)的DNA雜交分析與免疫分析方法研究.pdf

1、DNA雜交分析及免疫分析在生命科學(xué)研究中具有重要的意義，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷等方面。已有分析方法的局限性促使研究者們積極的研究普遍適用性好、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高的DNA雜交檢測(cè)及免疫檢測(cè)新方法。 本文將納米探針技術(shù)與高靈敏化學(xué)發(fā)光技術(shù)結(jié)合應(yīng)用于DNA雜交檢測(cè)及免疫檢測(cè)，對(duì)特定序列的寡聚核苷酸，人IgG及黃曲霉毒素B1進(jìn)行了超微量檢測(cè)，取得了令人滿意的結(jié)果。 以CoFe2O4/Au核殼復(fù)合納米顆粒標(biāo)記巰基化沙門氏菌特異

2、寡核苷酸序列，用納米金標(biāo)記沙門氏菌另一特異寡核苷酸序列，通過DNA雜交反應(yīng)與沙門氏菌特異目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)形成夾心結(jié)構(gòu)。經(jīng)過簡(jiǎn)單的磁分離，去除其他沒有雜交的部分，最后將磁分離得到部分的納米金溶出成為Au3+，結(jié)合luminol化學(xué)發(fā)光體系實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)DNA的高靈敏檢測(cè)。結(jié)果表明，發(fā)光強(qiáng)度和目標(biāo)DNA濃度在1-100pmol·L-1范圍內(nèi)相關(guān)性良好，對(duì)目標(biāo)DNA的檢測(cè)限為0.3pmol·L-1(3S/N)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6％(10pmo

3、l·L-1，n=7)。 同時(shí)以CoFe2O4/Au核殼復(fù)合納米顆粒為載體與羊抗人IgG構(gòu)建捕獲探針復(fù)合結(jié)構(gòu)，首先與目標(biāo)分析物人IgG發(fā)生免疫反應(yīng)，捕獲的人IgG再與納米金標(biāo)記的二抗(金標(biāo)羊抗人IgG)發(fā)生免疫反應(yīng)，形成三明治夾心結(jié)構(gòu)；通過磁分離去除未結(jié)合物質(zhì)干擾，將分離得到的標(biāo)記納米金溶出成為Au3+，結(jié)合Au3+催化luminol化學(xué)發(fā)光分析方法實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分析物人IgG的高靈敏檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件下，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與人IgG的濃

4、度在2-100ng·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為0.5ng·mL-1。 黃曲霉毒素B1的快速靈敏檢測(cè)在食品安全檢測(cè)工作中具有重要意義。本文建立了兩種基于銀增強(qiáng)納米金標(biāo)記探針的高靈敏度免疫分析方法。第一種方法用黃曲霉毒素B1(AFB1)抗體與金標(biāo)抗原、待測(cè)抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)，然后加入銀增強(qiáng)溶液，以金為核沉積生長(zhǎng)銀，通過檢測(cè)吸光度來確定待測(cè)物中AFB1的含量，該方法的檢出限可達(dá)到0.01ng·mL-1。第二種方法在前一

5、種方法的基礎(chǔ)上，將銀化學(xué)溶出，通過化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)沉積的銀的量來確定待測(cè)物中AFB1的含量，該方法的檢出限可達(dá)到0.002ng·mL-1。 論文還建立了納米金標(biāo)記-銀增強(qiáng)-化學(xué)發(fā)光聯(lián)用檢測(cè)沙門氏菌的新方法。通過沙門氏菌捕獲探針、金標(biāo)沙門氏菌顯示探針與沙門氏菌目標(biāo)核酸序列之間的DNA雜交，形成三明治復(fù)合體，然后通過銀增強(qiáng)在標(biāo)記的納米金表面選擇性沉積銀，實(shí)現(xiàn)第一次信號(hào)放大；隨后結(jié)合溶出化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)信號(hào)第二次放大。結(jié)果表明，在