寧波地區(qū)副溶血弧菌血清型和部分毒力基因的分布研究.pdf

1、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)為革蘭氏陰性的短桿菌，常存在魚類和貝類等海產(chǎn)品中，分布于海岸線等世界各地。在沿海地區(qū)和國家，副溶血弧菌是引發(fā)食性疾病的重要病原菌。研究數(shù)據(jù)表明，50％-70％因食用海產(chǎn)品引發(fā)的腹瀉病例是由副溶血弧菌引起的。此菌主要通過消化道感染，患者出現(xiàn)腹瀉、腹部痙攣、惡心、嘔吐、發(fā)熱，甚至脫水、昏迷等癥狀。副溶血弧菌也是我國海水養(yǎng)殖魚、蝦、貝類的重要病原，每年由此菌引起的弧菌病給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重

2、的損失。在浙江省沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖中，該菌與哈維氏弧菌、溶藻弧菌等重要病原弧菌一起，主要危害大黃魚幼魚，每年的高溫季節(jié)可引起大量的死亡。 致病微生物的快速檢測與分離技術(shù)是致病微生物研究的熱點之一。PCR能快速檢測食品中存在的致病微生物，是一種有效的快速檢測手段。建立副溶血弧菌的快速簡便的鑒定和分子分型方法，對于開展海產(chǎn)品生產(chǎn)加工過程中副溶血弧菌污染源調(diào)查和控制，提高食品的微生物衛(wèi)生質(zhì)量具有重要意義。本文以具有副溶血弧菌種特異性的毒力調(diào)

3、控基因toxR基因，建立聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)方法以鑒別海產(chǎn)品中分離的的副溶血弧菌。71株分離菌以toxR基因為靶基因均能擴增出340bp的目的片段，并且存在于所有的分離菌株中，具有良好的保守性。以toxR作為靶基因的PCR法快速鑒定副溶血弧菌，靈敏度高、一致性和特異性較好。 副溶血弧菌具有多種毒力因子，致病菌株能夠產(chǎn)生熱穩(wěn)定性溶血素有熱穩(wěn)定直接溶血素(thermostabledirecthemolysin，TDH)、熱不穩(wěn)定

4、溶血素(thermolabilehemolysin，TLH)和相對熱穩(wěn)定直接溶血素(TDH-relatedhemolysin，TRH)。研究寧波地區(qū)副溶血弧菌不同血清型菌株主要毒力基因的分布情況，從貝類中分離并鑒定副溶血弧菌，得到副溶血弧菌菌株71株，并對主要毒力基因(TLH，TRh，TDH，toxR)進行了PCR檢測。結(jié)果表明所有菌株均能擴增出340bp左右的toxR基因片段，除了參考菌株BJI.1997以外，所有菌株均沒有擴增出TR

5、H基因片段，所有菌株均KP陰性并沒有擴增出269bp左右的TDH片段，TLH存在于所有分離菌株中。 參照GBPT478917-2003用標準血清進行副溶血弧菌血清學(xué)試驗，用最小抑菌濃度(MIC)法進行了氨芐青霉素、硫酸新霉素、硫酸慶大霉素、壯觀霉素、卡那霉素、硫酸土霉素、硫酸鏈霉素、鹽酸四環(huán)素、利福平等對四種不同血清型的副溶血弧菌的藥敏試驗。結(jié)果表明分離到的20株副溶血性弧菌主要分屬于2個血清群，分別為O1群占50％(10/20

6、)、O5群占15％(3/20)，有35％(7/20)的菌株出現(xiàn)自凝現(xiàn)象。藥敏試驗結(jié)果顯示：副溶血弧菌O1:KIII對卡那霉素敏感，所有菌株對氨芐青霉素耐受，對硫酸新霉素(NeomycinSulfate，NEO)和硫酸鏈霉素(StreptomycinSulfate，STR)敏感性無顯著差異(t測驗，P>0.05)。經(jīng)過96h魚類急性毒性試驗，檢測不同副溶血弧菌血清型對異育銀鯽的毒性。結(jié)果表明，不同血清型的副溶血弧菌對異育銀鯽的毒性大小差異