芬戈莫德對(duì)EAE大鼠的防治作用及對(duì)腦脊髓組織BAX,TLR9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：用不同劑量的芬戈莫德與潑尼松干預(yù)Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE)模型，從而比較其各組間的療效差別：同時(shí)觀察EAE在不同劑量的芬戈莫德作用下，其臨床表現(xiàn)、病理變化、腦脊髓組織內(nèi)BAX、TLR9表達(dá)水平的變化，由此推斷芬戈莫德作用于EAE的可能機(jī)制，為多發(fā)性硬化(Multipie sclerosis，MS)新的治療途徑提供有益的基礎(chǔ)實(shí)

2、驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：建立雌性Wistar大鼠EAE模型，選用完全福氏佐劑(completefreund’s adguvant，CFA)、豚鼠脊髓勻漿(guinea pig spinal cordhomogenate，GPSCH)和百日咳疫苗原漿液(pertussis vaccine，PV)制作的免疫抗原。干預(yù)治療選擇芬戈莫德和潑尼松。按隨機(jī)分配原則將70只雌性Wistar大鼠分成7組：正常對(duì)照組10只，EAE組(GPSCH+C

3、FA+PV組)10只、低劑量組(EAE+芬戈莫德0.03mg/kg·d組)10只，中劑量組(EAE+芬戈莫德0.1 mg/kg·d組)10只，較高劑量組(EAE+芬戈莫德0.3 mg/kg·d組)10只，高劑量組(EAE+芬戈莫德1.0mg/kg·d組)10只，潑尼松組(EAE+潑尼松5mg/kg·d)10只。第O天定為免疫抗原注射日，從抗原免疫后第1天開始按分組的藥物和劑量予以每天喂食一次，直到處死。在EAE組發(fā)病高峰期即第18天時(shí)處

4、死所有大鼠終止實(shí)驗(yàn)。對(duì)各組大鼠的發(fā)病情況、神經(jīng)功能評(píng)分等進(jìn)行觀察。制作大鼠腦脊髓組織切片進(jìn)行檢測(cè)：在光鏡下對(duì)蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色后切片進(jìn)行炎性病灶計(jì)數(shù)；對(duì)羅可沙爾堅(jiān)牢藍(lán)-焦油紫(Luxol fast blue，LFB)染色后切片進(jìn)行脫髓鞘情況觀察。對(duì)各組大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous，CNS)BAX和TLR9的表達(dá)情況進(jìn)行免疫組化方法和陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)檢測(cè)。利用SPSS17.0軟件

5、包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.臨床表現(xiàn)觀察：①正常對(duì)照組無發(fā)病大鼠。②與EAE組比較，低劑量組能延長(zhǎng)潛伏期，減輕臨床癥狀，減少體重下降(p<0.05)，發(fā)病率無明顯差異(p>0.05)。中劑量、較高、高劑量組和潑尼松組大鼠發(fā)病率顯著降低、潛伏期明顯延長(zhǎng)、臨床癥狀明顯減輕，體重下降明顯減少(與EAE組比較，p<0.05)。
　　 2.病理結(jié)果觀察：(1)炎性病灶數(shù)：①正常對(duì)照組大鼠HE染色示側(cè)腦室周圍

6、無炎性病灶。EAE組可見較多炎性細(xì)胞浸潤。②不同劑量FTY720組和潑尼松組與EAE組相比，不同劑量FTY720組和潑尼松組炎性病灶數(shù)明顯減少(p<0.05)；③中劑量組、較高劑量組與潑尼松組三者之間差異無顯著性(p>0.05)；④高劑量組中可見極少炎癥病灶，與正常對(duì)照組比較無顯著性異常(p>0.05)。(2)LFB染色：正常對(duì)照組LFB染色顯示大鼠CNS無髓鞘脫失，EAE組可見較多典型脫髓鞘病灶。
　　 3.免疫組化結(jié)果觀察：

7、①與正常對(duì)照組比較，EAE組BAX的表達(dá)水平下降(p<0.05)，TLR9表達(dá)水平升高(p<0.05)。②EAE組與不同劑量的FTY720組和潑尼松組相比，其TLR9表達(dá)水平升高(p<0.05)，BAX表達(dá)水平降低(p<0.05)。中劑量、較高劑量組與潑尼松組三者之間無明顯差異(p>0.05)，而三者與高劑量組之間比較均有顯著性差異(p<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.FTY720對(duì)EAE大鼠具有防治作用，且其作用