血小板生成素受體及其新配體hNUDC的可溶性表達(dá)與純化.pdf

1、血小板減少癥是臨床上一個(gè)突出的問題，而近年來隨著化療和放療處理的癌癥病人和骨髓移植病人的大量增加，出現(xiàn)血小板缺乏癥的病人急劇增加。然而，目前還沒有理想的治療血小板減少癥的藥物，所以很多國(guó)家都致力開發(fā)一種更有效的治療血小板減少癥的藥物。與血小板生成素受體(Thrombopoietin Receptor，Mpl)胞外區(qū)(Mpl-EC)結(jié)合的多肽或化合物可刺激血小板生成，這一點(diǎn)使人們認(rèn)識(shí)到Mpl的新配體可以成為篩選新藥的突破點(diǎn)。 Mp

2、l屬于造血因子受體超家族，其胞外區(qū)由兩個(gè)細(xì)胞因子受體組件(CytokineReceptor Module，CRM)構(gòu)成，各細(xì)胞因子受體組件又分別由兩個(gè)相對(duì)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。本文以設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增了c-Mpl-EC基因。為了能使表達(dá)的蛋白有更加正確結(jié)構(gòu)和較高可溶性，構(gòu)建了基因與泛素類蛋白SUMO的融合表達(dá)載體。在大腸桿菌中成功獲得了可溶性表達(dá)的c-Mpl-EC蛋白，并將其純化，進(jìn)行Western Blot鑒定。受體是當(dāng)前藥物研究的核心，受體是

3、藥物結(jié)合的靶，細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng)通過其特異性膜結(jié)合受體介導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究細(xì)胞因子受體，闡明細(xì)胞因子作用的機(jī)制，研究和開發(fā)細(xì)胞因子的類似物或拮抗劑用于臨床應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。 為了進(jìn)一步尋找研究治療血小板減少癥的有效藥物，本實(shí)驗(yàn)室前期研究中，發(fā)現(xiàn)并證明人核遷移蛋白(hNUDC)為Mpl的另一枚配體。NUDC首先是在絲狀真菌Aspergillus nidulans中作為調(diào)控核遷移的nud基因發(fā)現(xiàn)的，A．nidulansNuDC基

4、因在人中的同源物(hNUDC)已被克隆。hNUDC是一種在多種細(xì)胞中與微管動(dòng)力中心結(jié)合并且相互作用的多功能蛋白。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增了hNUDC基因，并構(gòu)建了該基因與分子伴侶SUMO的融合表達(dá)的載體，在大腸桿菌中成功表達(dá)了可溶性的hNUDC蛋白，將其純化。本實(shí)驗(yàn)室的前期研表明，hNUDC與Mpl-EC結(jié)合的活性中心為hNUDC中一段400bp的片段，將此段基因克隆構(gòu)建到酵母表達(dá)載體中，并在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，得到了分泌表達(dá)的hNUDC