神經(jīng)營養(yǎng)因子相關(guān)基因在骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)元中的表達(dá).pdf

1、目的： 體外誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞，并觀察誘導(dǎo)分化前后神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體相關(guān)基因的表達(dá)變化，以探索骨髓基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的可能機制。 方法： 體外培養(yǎng)經(jīng)Percoll(1.073g/mL)分離獲得的大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞并傳代擴增，用二甲亞砜(DMSO)，丁羥回醚(BHA)誘導(dǎo)分化，采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，分化后細(xì)胞用神經(jīng)絲蛋白抗體，膠質(zhì)原性纖維酸性蛋白抗體作細(xì)胞免疫熒光檢測。采用半定量

2、RT-PCR檢測分化前和分化后2h，6h，12h，24h和48h神經(jīng)生長因子(NGF)，腦源性神經(jīng)因子(BDNF)，神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3)及其相應(yīng)受體TrkA，TrkB，TrkC和神經(jīng)營養(yǎng)因子低親和力受體p75NTR的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1.骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化后2h即出現(xiàn)形態(tài)學(xué)變化，表現(xiàn)為細(xì)胞胞體呈球形，突起增多，形態(tài)類似神經(jīng)元。細(xì)胞免疫熒光檢測顯示著色的神經(jīng)絲蛋白(NF)抗體標(biāo)記的神經(jīng)元細(xì)胞，GFAP不著色

3、。 2.在骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化前后都有NGF和BDNF持續(xù)表達(dá)，但分化后NGF逐漸降低，TrkA,TrkB在分化前細(xì)胞中不表達(dá)，在誘導(dǎo)分化開始后12h可以檢測到他們的表達(dá)，而NT-3，TrkC在分化前后都不表達(dá)。 3.p75NTR在誘導(dǎo)分化后6h開始出現(xiàn)表達(dá)，12后顯著降低并很快消失。 結(jié)論： 骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體外可以定向誘導(dǎo)為神經(jīng)細(xì)胞，誘導(dǎo)分化前后神經(jīng)營養(yǎng)因子(NT)及其Trk受體和p75受體的表達(dá)發(fā)生了顯著