酸解氧化魔芋葡甘露聚糖免疫及脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)機理研究.pdf

1、本研究采用氧化酸解法成功制備了氧化魔芋葡甘露聚糖(OKGM)及其酸解產(chǎn)物(A-OKGM)，并對二者進行了特性分析;選取450尾魚，進行為期60天的飼養(yǎng)試驗，首先考察了較高劑量(4.0、8.0、16.0、32.0 g/kg)的OKGM對齊口裂腹魚腸道性能及腸道菌群的影響;進一步再在齊口裂腹魚飼料中不添加、添加8.0、16.0、32.0 g/kg的OKGM及添加8.0、16.0、32.0 g/kg的A-OKGM，共選取840尾，進行了2批為

2、期60天的飼養(yǎng)試驗;通過飼養(yǎng)試驗研究了不同水平的OKGM及A-OKGM對齊口裂腹魚生長性能的影響;通過飼養(yǎng)試驗和攻毒試驗研究了不同水平的OKGM及A-OKGM對齊口裂腹魚免疫性能的影響;克隆了齊口裂腹魚IL-1β、TNF-α和TLR22基因片段，并通過飼養(yǎng)試驗考察了不同水平的OKGM及A-OKGM對其頭腎、中腎、脾臟和腸道IL-1β、TNF-α和TLR22基因表達(dá)的影響;60天飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，對齊口裂腹魚腹腔注射嗜水氣單胞菌，考察感染6

3、h后免疫性能及頭腎、中腎、脾臟和腸道中IL-1β、TNF-α和TLR22基因表達(dá)情況;克隆了齊口裂腹魚LPL和FAS基因片段，并通過飼養(yǎng)試驗考察了不同水平的OKGM及A-OKGM對齊口裂腹魚脂肪含量及肝臟和肌肉中LPL和FAS基因表達(dá)的影響。研究結(jié)果如下:
　　1.HCl酸解法顯著降低了OKGM的特性粘度，OKGM和A-OKGM的特性粘度分別為822.82 cm3/g和46.55 cm3/g，通過Mark-Houwink公式推算，

4、二者的粘均分子量分別為4.7×105 Da和9.2×103 Da;從掃描電鏡結(jié)果來看，KGM表面呈鱗片狀，有明顯的平行條狀褶皺，OKGM顆粒表面顯得平整致密，而A-OKGM表面粗糙，酸腐蝕現(xiàn)象較為明顯。從DSC熱特征分析結(jié)果表明，經(jīng)H2O2氧化后的OKGM熱穩(wěn)定性與KGM相差不大，而經(jīng)HCl酸解處理得到的A-OKGM，熱穩(wěn)定性明顯低于KGM和OKGM;紅外光譜分析結(jié)果表明，利用鹽酸降解氧化魔芋葡甘露聚糖，并不會改變魔芋葡甘露聚糖的主鏈結(jié)

5、構(gòu)。
　　2.日糧中添加16.0 g kg-1 OKGM會顯著提高齊口裂腹魚前腸黏膜褶皺高度(P＜0.05)，而日糧中添加4.0 g kg-1-32.0g kg-1OKGM會不同程度的提高中腸和后腸黏膜褶皺高度(P＜0.05)。8.0-32.0 g kg-1 OKGM組前腸黏膜上皮高度顯著高于對照組(P＜0.05)，在中腸，8.0和16.0 g kg-1OKGM組黏膜上皮高度顯著提高(P＜0.05)，在后腸中，各OKGM組的黏膜上

6、皮高度均顯著高于對照組(P＜0.05)。從黏膜下層厚度可以看到，在前腸中，OKGM組均顯著高于對照組(P＜0.05)，在中腸中，4.0-16.0 g kg-1OKGM組顯著高于對照組(P＜0.05)，而后腸中8.0 g kgl和16.0 gkg-1組顯著高于對照組(P＜0.05)。第4.0和8.0 g kgl OKGM組前腸和中腸外縱肌層厚度顯著高于對照組(P＜0.05)。各OKGM組前腸內(nèi)環(huán)肌層厚度均顯著高于對照組(P＜0.05)，4

7、.0和8.0 g kg-1 OKGM中腸內(nèi)環(huán)肌層厚度顯著增加(P＜0.05)，此外，第8.0 g kgl OKGM組后腸內(nèi)環(huán)肌層厚度也顯著提高(P＜0.05)。與對照組相比，32.0 g kgl OKGM組前腸杯狀細(xì)胞顯著低于對照組(P＜0.05)，而在中腸和后腸，各組與對照組差異不顯著(P＞0.05)。從聚類分析可以看出，4.0和8.0 g kg1OKGM組先聚為一類，再和16.0 g kgl OKGM組聚到一類，然后和32.0 g

8、kgl OKGM組聚為一類，最后與對照組聚到一起。對照組腸道菌群多樣性指數(shù)顯著低于OKGM組(P＜0.05)，而其余各組差異不顯著(P＞0.05)。
　　3.與對照組相比，在齊口裂腹魚日糧中添加8.0 g kg-1的A-OKGM顯著（P＜0.05）增加了齊口裂腹魚的增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率，顯著降低了餌料系數(shù)（P＜0.05），其余各組的生長性能指標(biāo)與對照組差異不顯著(P＞0.05)。日糧中添加OKGM和A-OKGM對齊口裂腹

9、魚頭腎指數(shù)、中腎指數(shù)、脾體指數(shù)、腸長指數(shù)及腸體指數(shù)無顯著影響;8.0 g kg-1 A-OKGM組的血清溶菌酶活性顯著高于(P＜0.05)對照組，而16.0 g kg-1 A-OKGM組血清溶菌酶活性極顯著高于(P＜0.01)對照組，8.0 g kgl OKGM組血清補體C3含量顯著高于(P＜0.05)對照組，8.0 g kgl和16.0 g kgl A-OKGM組血清補體C3含量極顯著高于(P＜0.01)對照組;第5、6、7組血清Ig

10、M含量極顯著高于(P＜0.01)對照組;32.0 g kg-1 OKGM組和8.0 g kg-1A-OKGM組血清SOD活性極顯著高于(P＜0.01)對照組，8.0 g kgl和16.0 g kglOKGM組和16.0 g kgl A-OKGM組血清SOD活性顯著高于(P＜0.05)對照組;各試驗組血清MDA含量極顯著低于(P＜0.01)對照組;各試驗組血清GSH-Px活性差異不顯著(P＞0.05);攻毒后第2天后和第10天后，各組成活

11、率差異不顯著(P＞0.05)，攻毒第6天后，8.0 g kg-1 A-OKGM組的成活率顯著高于(P＜0.05)對照組，攻毒第14天后，8.0 g kg-1 A-OKGM組的成活率極顯著高于(P＜0.01)對照組，其中，對照組的成活率最低。
　　4.克隆了齊口裂腹魚IL-1β、TNF-α及TLR22基因的部分片段，其片段大小分別為120bp、116 bp和174bp，編碼39、38和58個氨基酸;32.0 g kg-1 OKGM組

12、及8.0 g kgl、16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM組脾臟IL-1β表達(dá)量顯著(P＜0.05)高于對照組，8.0 g kg-1 A-OKGM組頭腎IL-1β表達(dá)量顯著(P＜0.05)高于對照組，8.0 g kgl OKGM組和16.0 g kgl A-OKGM組腸道IL-1β表達(dá)量顯著(P＜0.05)高于對照組，中腎中各組IL-1β表達(dá)量差異不顯著(P＞0.05);16.0 g kg-1和32.0g kgl

13、A-OKGM組脾臟TNF-α的表達(dá)量顯著(P＜0.05)高于對照組，32.0 g kglOKGM組和8.0 g kgl A-OKGM組頭腎中TNF-α的表達(dá)量顯著高于(P＜0.05)對照組，與對照組相比，8.0 g kg-1 OKGM組中腎TNF-α的表達(dá)量顯著上調(diào)(P＜0.05)，其余各組差異不顯著(P＞0.05)，腸道中，32.0g kgl A-OKGM組TNF-α的表達(dá)量顯著高于(P＜0.05)對照組;在脾臟和中腎中，16.0 g

14、 kgl A-OKGM組TLR22mRNA的表達(dá)量顯著高于(P＜0.05)對照組，8.0 g kg-1 A-OKGM組頭腎TLR22的表達(dá)量顯著高于(P＜0.05)對照組，而與對照組相比，各組腸道TLR22表達(dá)量差異不顯著(P＞0.05)。
　　因此，得出如下結(jié)論:
　　1.采用鹽酸降解OKGM，不會改變KGM的主鏈結(jié)構(gòu)，且能顯著降低其特性粘度，獲得低分子量OKGM，制備方法切實可行。
　　2.日糧中添加4.0-32.

15、0 g kg-1 OKGM能有效改善齊口裂腹魚的腸道形態(tài)，調(diào)節(jié)腸道菌群，其中，16.0 g kg-1效果最為顯著。
　　3.在齊口裂腹魚日糧中添加8.0 g kg-1-32.0 g kg-1的OKGM或A-OKGM均能不同程度地提高生長性能，增強齊口裂腹魚的免疫活性和抗氧化性能，提高攻毒后魚的成活率，其中，8.0 g kg-1 A-OKGM組作用最為顯著。
　　4.日糧中添加OKGM和A-OKGM會上調(diào)齊口裂腹魚IL-1β、

16、TNF-α和TLR22基因在頭腎、中腎、脾臟和腸道中的表達(dá)，其中，8.0 g kg-1和16.0 g kg-1A-OKGM最為顯著。
　　5.日糧中添加OKGM和A-OKGM能不同程度的上調(diào)感染嗜水氣單胞菌齊口裂腹魚頭腎、中腎、脾臟和腸道中IL-1β、TNF-α和TLR22的表達(dá);日糧中添加8.0 g kg-1 A-OKGM能顯著增強感染嗜水氣單胞菌齊口裂腹魚血清補體C3含量和溶菌酶活性。
　　6.日糧中添加OKGM和A-O