魔芋甘露聚糖肽的制備工藝及理化特性研究.pdf

1、甘露聚糖肽是我國首創(chuàng)的一種免疫增強(qiáng)劑，具有抑制腫瘤生長、促進(jìn)免疫系統(tǒng)、刺激造血等功能，這使得甘露聚糖肽的臨床需求量逐年擴(kuò)大。目前我國主要通過深層培養(yǎng)發(fā)酵健康人口腔中分離的a-溶血鏈球33＃菌株，再經(jīng)分離純化制備甘露聚糖肽，產(chǎn)量較低，因此有必要尋求其他生產(chǎn)甘露聚糖肽的途徑。
　　我國是魔芋種植大國，目前我國對魔芋的利用主要是生產(chǎn)魔芋精粉，精粉生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的大量魔芋飛粉因其苦澀味等原因而大多被廢棄掉，只有極少一部分得到利用。研究表明

2、，魔芋飛粉中主要含有大量的葡甘聚糖、粗蛋白、糖蛋白，是制備甘露聚糖肽的天然優(yōu)質(zhì)資源。
　　本研究以魔芋飛粉為原料提取分離魔芋甘露聚糖肽，研究其制備工藝。首先提取魔芋飛粉中的糖蛋白，用蛋白酶對提取出的糖蛋白進(jìn)行酶解，得到魔芋粗糖肽液，其次采用Sevage法去除其中的雜質(zhì)多肽，然后經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析、Sephadex G-100柱層析和ConA-Sepharose4B柱層析進(jìn)行分級純化，得到純度較高的魔芋甘露聚糖肽。最后對魔

3、芋甘露聚糖肽進(jìn)行定性分析和含量測定，并對其的理化性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果如下：
　　1.研究了魔芋糖蛋白的提取工藝。采用堿溶酸沉法對魔芋飛粉中的糖蛋白進(jìn)行提取，以蛋白質(zhì)提取率為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化糖蛋白的提取工藝。結(jié)果表明：魔芋糖蛋白的等電點(diǎn)為pH3.8，最佳提取條件為提取料液比1:35、提取溫度50℃、提取時(shí)間50 min、提取pH10.0。在此工藝條件下，得到的蛋白提取率為34.72％。
　　2.研究了魔芋糖肽的

4、制備工藝。采用堿性蛋白酶對提取出的魔芋糖蛋白進(jìn)行酶解，以多肽得率（TCA-SN）和水解度（DH）為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化魔芋糖肽制備工藝。結(jié)果表明：最佳提取條件為酶解pH8.5、酶解溫度50℃、酶用量3500 U/g、酶解時(shí)間150 min。在該組合條件下得到的多肽得率和水解度分別為11.98%和9.19%。
　　3.研究了魔芋粗糖肽中雜質(zhì)多肽的脫除工藝。采用Sevage試劑法對粗糖肽進(jìn)行脫雜肽處理，以多肽去除率為指標(biāo)

5、，衡量糖肽中雜質(zhì)多肽的脫除效果。單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)結(jié)果表明：Sevage試劑添加比例1:2、氯仿與正丁醇比例4:1、室溫下脫雜肽40 min，所得的多肽去除率最高，為24.27%，脫雜肽效果最好。
　　4.研究了魔芋甘露聚糖肽的分級純化技術(shù)。采用DEAE-52纖維素和Sephadex G-100柱層析分離，收集經(jīng)紫外吸收法檢測（280 nm）和苯酚-硫酸法檢測（490 nm）共有峰處的洗脫液，分離魔芋甘露聚糖肽。結(jié)果表明：DEA

6、E-52纖維素柱層析分離時(shí)，多肽和多糖的共有峰分布于第27-44管之間；Sephadex G-100柱層析分離時(shí)，多肽和多糖的共有峰有兩處，分別分布于第6-13管和第21-35管之間。再采用ConA-Sepharose4B柱層析對分離出的樣品進(jìn)行純化，即可得到較純的魔芋甘露聚糖肽。
　　5.通過高效液相色譜對得到的魔芋甘露聚糖肽進(jìn)行定性分析，結(jié)果表明：魔芋甘露聚糖肽中所含的氨基酸種類與甘露聚糖肽對照品的氨基酸基本一致；魔芋甘露聚糖