魔芋甘露聚糖肽制備技術(shù)研究.pdf

1、甘露聚糖肽（Mannatide），曾用名多抗甲素(Polyactin)，是我國(guó)首創(chuàng)的一種新型免疫增強(qiáng)劑。大量臨床研究表明，甘露聚糖肽能減輕放療化療的毒副作用，增強(qiáng)和調(diào)節(jié)患者的免疫功能，適用于免疫功能低下的各種疾病。目前國(guó)內(nèi)制備甘露聚糖肽主要是通過a-溶血鏈球33#菌株經(jīng)深層培養(yǎng)發(fā)酵提取而得。隨著科研技術(shù)的進(jìn)步，各種食源性多肽因其易吸收、無毒副作用、安全性高等優(yōu)勢(shì)，已成為制備生物活性肽的重要來源。
　　我國(guó)是世界上魔芋種植量最大的國(guó)

2、家，也是最大的魔芋生產(chǎn)國(guó)。目前我國(guó)對(duì)魔芋的利用主要集中在魔芋精粉（葡甘露聚糖），而魔芋精粉加工過程中產(chǎn)生的魔芋飛粉大多以飼料或干燥劑低價(jià)出售。研究表明，魔芋飛粉中含有豐富的甘露聚糖和蛋白質(zhì)，是獲得甘露聚糖肽的良好來源。
　　本文以魔芋飛粉為原料，通過發(fā)酵法和酶解法制備了魔芋多肽;并以酶解法得到的魔芋多肽為實(shí)驗(yàn)材料，通過超濾分離，凝膠過濾色譜分離等方法從中分離出魔芋甘露聚糖肽，得到了以下結(jié)果:
　　1.研究了魔芋多肽發(fā)酵法制備

3、工藝，結(jié)果表明:以多肽得率為考察指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，得出最佳發(fā)酵工藝條件為:菌種比例（米曲霉:枯草芽孢桿菌）1∶2、接種量6mL、發(fā)酵時(shí)間40h、發(fā)酵溫度34℃、發(fā)酵基質(zhì)pH8.0，在此工藝條件下魔芋多肽的最高得率為5.78％。
　　2.研究了魔芋多肽酶解法制備工藝。以水解度為考察指標(biāo)，分別采用堿性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶水解魔芋飛粉，結(jié)果表明:酶解魔芋飛粉制備魔芋多肽的最佳用酶為堿性蛋白酶

4、。
　　以魔芋多肽得率為考察指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定出最佳的酶解工藝條件為:料液比1∶20、酶解溫度50℃、酶解時(shí)間180min、酶解環(huán)境的pH8.0、加酶量3300U/g，在此工藝條件下魔芋多肽的最高得率為8.72％。
　　3.采用超濾分離將魔芋多肽分離成了四個(gè)分子量區(qū)段，即區(qū)段Ⅰ(M＞300KDa)、區(qū)段Ⅱ(100KDa＜M＜300KDa)、區(qū)段Ⅲ(10KDa＜M＜100KDa)和區(qū)段Ⅳ(M＜10KDa)，多

5、肽總的回收率為73.37％，其中10KDa＜M＜100KDa區(qū)段的分子量范圍與甘露聚糖肽標(biāo)準(zhǔn)品一致，初步判斷其主要為甘露聚糖肽。
　　采用SephadexG-100凝膠過濾色譜對(duì)超濾后的10KDa＜M＜100KDa區(qū)段的甘露聚糖肽進(jìn)行了進(jìn)一步分離，得到了N1、N2和N3三個(gè)組分。研究得出的最佳洗脫條件為:洗脫劑為蒸餾水，上樣量為5mL，樣品濃度為150mg/mL，洗脫流速為0.8mL/min。
　　通過SDS-PAGE測(cè)定了

6、N1，N2和N3組分的分子量，得出N1組分的分子量范圍為70～100KDa，N2組分的分子量范圍為30KDa～70KDa，N3組分的分子量范圍為10KDa～20Kda。
　　將甘露聚糖肽標(biāo)準(zhǔn)品與SephadexG-100分離后的N1，N2和N3組分的氨基酸圖譜進(jìn)行比對(duì)得知:N2組分與甘露聚糖肽的相似度最高，測(cè)定得知其中的甘露聚糖肽含量為0.307mg/mL。
　　4.對(duì)SephadexG-100分離后的N2組分的化學(xué)組成進(jìn)行