NGX6對(duì)Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響及姜黃素促進(jìn)NGX6抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多階段事件，其發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)抑瘤基因的失活和瘤基因的激活。我們的前期工作已經(jīng)證實(shí)NGX6在結(jié)腸癌，尤其是有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯下調(diào)甚至缺失，轉(zhuǎn)染NGX6的結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29的細(xì)胞周期可被阻滯在G1一S期，從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的過(guò)度增殖。同時(shí)，NGX6基因通過(guò)下調(diào)EGF介導(dǎo)的酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路中的一些與增殖相關(guān)的重要分子的表達(dá)而發(fā)揮抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的效應(yīng)，并初步揭示NGX6可能通過(guò)下調(diào)MM

2、Pl4的表達(dá)而參與大腸癌轉(zhuǎn)移的抑制。進(jìn)一步通過(guò)高通量基因芯片技術(shù)檢測(cè)NGX6基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞系HT一29基因表達(dá)譜的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)表達(dá)差異3倍以上的基因有377個(gè)。其中有4個(gè)與Wnt信號(hào)通路有關(guān)的基因，表達(dá)上調(diào)基因DKKl，表達(dá)下調(diào)基因ILK、MMPl以及COL11Al。這些分子的表達(dá)上／下調(diào)均能導(dǎo)致結(jié)腸癌中Wnt信號(hào)通路的抑制，并能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。這提示NGX6基因有可能通過(guò)參與調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路上的相關(guān)分子發(fā)揮抑制結(jié)腸

3、癌增殖和轉(zhuǎn)移的作用。 本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，深入研究了NGX6對(duì)Wnt信號(hào)通路的影響。通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因分析測(cè)定法檢測(cè)NGX6對(duì)結(jié)腸癌HT一29細(xì)胞系中Wnt通路的關(guān)鍵分子Tcf4及下游靶基因cyclinDl的活性的影響。發(fā)現(xiàn)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染了NGX6的HT一29細(xì)胞系中Tcf4的活性下降。通過(guò)Western blot方法檢測(cè)NGX6對(duì)Wnt通路下游靶基因c—myc、cyclinDl的表達(dá)的影響，顯示NGX6轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的兩種蛋白表

4、達(dá)均有下降。運(yùn)用RT-PCR方法檢測(cè)：NGX6對(duì)Wnt通路下游基因COX-2的影響，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了NGX6的HT-29細(xì)胞的COX-2mRNA水平下降。因此，推斷NGX6基因通過(guò)Wnt信號(hào)通路抑制結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29的增殖與轉(zhuǎn)移。 姜黃素是從姜科姜黃屬植物姜黃的根莖中提取的一種酚類色素，主要藥理作用包括抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化等，且毒性很低。目前其作為一種安全的抗腫瘤藥物引起多數(shù)學(xué)者的關(guān)注，本研究為明確姜黃素與NG

5、X6在抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡及改善細(xì)胞間連接通訊功能方面是否存在協(xié)同效應(yīng)，擬在前部分研究基礎(chǔ)上，通過(guò)生長(zhǎng)曲線、MTT、劃痕實(shí)驗(yàn)、AO／EB、流式細(xì)胞術(shù)方法來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。MTT結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了NGX6組的細(xì)胞在570nm處的吸光度較空白載體組下降(p<0.05)；而姜黃素干預(yù)后的吸光值明顯下降；劃痕實(shí)驗(yàn)顯示NGX6轉(zhuǎn)染組細(xì)胞間隙連接通訊功能增加而姜黃素干預(yù)后此功能增加更明顯，提示姜黃素與NGX6在以上方面存在協(xié)同作用，且呈劑量依賴效應(yīng)；