超聲介導(dǎo)胰酶抑制劑溫敏凝膠局部給藥治療胰腺損傷的研究.pdf

1、目的: 探討超聲造影引導(dǎo)胰酶抑制劑甲磺酸加貝酯溫敏凝膠(GMTI)局部注射治療胰腺損傷的可行性及有效性。
　　材料與方法: (1)將泊洛沙姆407、甲磺酸加貝酯（GM，包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml組）及甲磺酸加貝酯溫敏凝膠（GMTI，包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml組）分為9組，分別吸取各組樣品25μl與等體積胰蛋白酶溶液（1.0mg/ml）混勻用作待測溶液，根據(jù)大鼠

2、胰蛋白酶ELISA檢測試劑盒所述步驟檢測并評估GMTI體外抑制胰蛋白酶活性的有效濃度。(2)42只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、GM組、GMTI組（包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml組），每組6只。除對照組外，余大鼠麻醉后開腹統(tǒng)一制作Ⅱ級胰腺損傷模型。GMTI組于病灶處直接注射對應(yīng)濃度的藥物(0.3ml/100g)，GM組經(jīng)大鼠尾靜脈注射GM(0.3ml/100g)，模型組于病灶處注射等量0.9％生理鹽水。術(shù)后

3、24h處死大鼠并收集血液及胰腺組織，分離血清后按照大鼠血清淀粉酶(AMS)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、胰蛋白酶原激活肽(TAP) ELISA檢測試劑盒所述步驟檢測各指標(biāo)水平，胰腺組織固定后行病理學(xué)檢測。(3)42只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組（包括1h、6h、24h組）、GMTI組（包括1h、6h、24h組），每組6只。除對照組外，麻醉后開腹統(tǒng)一制作Ⅲ級胰腺損傷模型。GMTI組于病灶處直接注射藥物(10mg/ml，0.3ml/100g)，模型

4、組于病灶處直接注射等量0.9％生理鹽水。術(shù)后分別于1h、6h、24h處死大鼠并收集血液及胰腺組織，記錄腹腔積液量，使用大鼠ELISA檢測試劑盒測定血清AMS、CRP、脂肪酶(LPS)、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子(TNF-α)水平，胰腺組織固定后行病理學(xué)檢測。(4)5只比格犬，全麻后開腹統(tǒng)一制作Ⅲ級胰腺損傷模型，將十二指腸降段間斷固定于右側(cè)腹壁。分別于術(shù)后即刻、1d、2d、3d行超聲造影檢查。記錄腹腔積液量。于術(shù)前、術(shù)后1d、2

5、d、3d測定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。術(shù)后3d取材行胰腺組織病理學(xué)檢查。(5)15只比格犬全麻后開腹統(tǒng)一制作Ⅲ級胰腺損傷模型，超聲造影引導(dǎo)下胰周留置引流管。隨機(jī)分為模型組、GMTI組、GM組，每組5只。GMTI組于超聲引導(dǎo)下經(jīng)導(dǎo)管注射藥物至胰腺（4.63ml/10kg），GM組靜脈滴注GM（4.625ml/10kg），模型組經(jīng)導(dǎo)管注射等量0.9％生理鹽水。分別于術(shù)后即刻、1d、2d、3d、7d

6、行超聲造影檢查。記錄腹腔積液量及引流量。于術(shù)前、術(shù)后1d、2d、3d、7d測定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。術(shù)后7d取材行胰腺組織病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果: (1)泊洛沙姆P-407單獨(dú)對胰蛋白酶活性無影響;與泊洛沙姆P-407相比，10mg/ml和20mg/mlGM及GMTI可完全抑制胰蚤白酶活性（P＜0.01）。(2)與對照組相比，PT組血清AMS、CRP、TAP水平顯著增高(P＜0.01

7、);與PT組相比，GM組AMS、CRP、TAP水平顯著下降(P＜0.01)，10mg/ml和20mg/ml組GMTI可顯著抑制AMS、CRP、TAP的表達(dá)(P＜0.01);4組GMTI均完全抑制了TAP的表達(dá)(P＜0.01)。PT組病理改變較GM組與GMTI組明顯，出現(xiàn)胰腺水腫，部分腺泡及胰島結(jié)構(gòu)破壞，核深染，伴有炎細(xì)胞浸潤及少量出血。(3)與對照組相比，PT組AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α水平均明顯升高(P＜0.01);

8、與PT組相比， GMTI組各指標(biāo)均明顯降低(P＜0.01);與GMTI組相比，造模后1h PT組各指標(biāo)明顯升高(P＜0.01)，GMTI組略下降(P＜0.01)，造模后6h與24h，PT組AMS活性明顯升高(P＜0.01)，GMTI治療組各指標(biāo)明顯降低(P＜0.01)。GMTI組較PT組腹水量明顯減少（P＜0.01）。PT組鏡下見大范圍的腺泡結(jié)構(gòu)破壞，間質(zhì)脂肪組織壞死，炎細(xì)胞浸潤及出血，GMTI組腺泡結(jié)構(gòu)破壞程度明顯減輕。(4)超聲造影

9、清晰顯示創(chuàng)傷灶及活動性出血，創(chuàng)傷灶為雙期無增強(qiáng)或低增強(qiáng)。腹腔積液量1d較多，3d下降，腹水AMS、LIP升高。造模后1d至3d，前述各指標(biāo)均較術(shù)前升高，3d開始下降(P＜0.01，P＜0.05)。鏡下見部分胰腺細(xì)胞腫脹變性，核深染，伴灶性出血、壞死灶及炎細(xì)胞浸潤。(5)超聲造影示GMTI組創(chuàng)傷灶未見進(jìn)一步擴(kuò)大，PT組可見活動性出血及膿腫形成。腹腔積液量隨時間延長減少。GMTI組腹水AMS、LPS較GM組減低（P＜0.01）。兩治療組血清

10、AMS、LPS、CRP及尿TAP較PT組減低（P＜0.01，P＜0.05）。GM與GMTI組間無顯著差異。鏡下三組均出現(xiàn)腺體細(xì)胞壞死及纖維化，以GMTI組略輕。
　　結(jié)論: GMTI體外可抑制胰蛋白酶活性且有效濃度與GM相當(dāng);GMTI體內(nèi)對Ⅱ級和Ⅲ級大鼠胰腺損傷模型及比格犬Ⅲ級胰腺損傷模型均具有明顯保護(hù)作用，與陽性藥物GM相當(dāng);超聲造影引導(dǎo)下置管并局部注射GMTI治療胰腺損傷可行，GMTI有效抑制胰酶活性，減輕了胰腺組織的炎癥反