BST-2抑制流感病毒和HIV-1病毒樣顆粒釋放的研究.pdf

1、病毒作為一種特殊的生命體存在形式,感染宿主后,必須依賴宿主細(xì)胞蛋白的輔助因子,同時(shí)逃避或抵抗宿主細(xì)胞的限制因子,才能完成其感染和復(fù)制周期。反過(guò)來(lái),宿主細(xì)胞迫于病毒感染的壓力,必須進(jìn)化出抵御病毒的方式,這兩者的拮抗關(guān)系,構(gòu)成了兩者之間的進(jìn)化斗爭(zhēng),均從對(duì)方的選擇壓力中獲得益處,體現(xiàn)了宿主和病毒通過(guò)各自正選擇壓力后的進(jìn)化結(jié)果,同時(shí)決定了病毒的宿主范圍。
　　 宿主細(xì)胞限制因子是固有免疫系統(tǒng)中的組份,具有抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒的活性,組成了宿主

2、細(xì)胞中影響病毒生活周期各個(gè)階段的負(fù)面因子,包括TRIM-5a、APOBEC3G、APOBEC3F和Tetherin(BST-2,CD317,HM1.24)等。
　　 在對(duì)HIV-1的研究中,發(fā)現(xiàn)BST-2是拮抗HIV-1 Vpu蛋白的宿主細(xì)胞限制因子。研究還發(fā)現(xiàn),BST-2不僅能抑制HIV-1從細(xì)胞表面釋放,還對(duì)SIV等多種包膜病毒具有類似的功能,在這些病毒中,都能找到與之拮抗的蛋白。BST-2由胞漿區(qū)(CT),跨膜區(qū)(TM),

3、胞外卷曲螺旋區(qū)(CC)和GPI錨構(gòu)成,胞外區(qū)中53,63,91位為三個(gè)半胱氨酸殘基,是二硫鍵形成位點(diǎn)。65,92位為兩個(gè)天門冬酰胺,屬于糖基化位點(diǎn)。
　　 本研究采用甲型流感A/WSN/33病毒顆粒和密碼子優(yōu)化的表達(dá)人類免疫缺陷病毒HIV—1 gag和gag—pol蛋白質(zhì)粒所裝配成的病毒樣顆粒作為研究對(duì)象。研究BST-2及其各種突變體對(duì)流感病毒顆粒和HIV-1病毒樣顆粒的抑制情況。針對(duì)流感病毒的實(shí)驗(yàn)揭示,瞬時(shí)和穩(wěn)定表達(dá)BST-2

4、的哺乳動(dòng)物細(xì)胞能明顯抑制流感病毒,BST-2胞漿區(qū)及跨膜區(qū)發(fā)揮重要作用；而在抑制HIV-1病毒樣顆粒釋放的實(shí)驗(yàn)中,跨膜區(qū),胞外區(qū)以及GPI錨都是不可或缺的。
　　 本論文中,我們的研究對(duì)象不同于以往使用流感病毒NA蛋白單獨(dú)包裝成病毒樣顆粒,而是通過(guò)反向遺傳操作系統(tǒng)拯救得到完整的病毒顆粒,更全面直觀地驗(yàn)證了BST-2對(duì)流感病毒的抑制；不同于針對(duì)HIV-1感染性克隆的研究方法,采用表達(dá)HIV-1gag和gag-pol蛋白質(zhì)粒所裝配成