內(nèi)皮細(xì)胞特異性分泌分子EGF-like domain 7（EGFL7）的初步研究.pdf

1、背景和目的： 本研究利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測人髂動(dòng)脈AS斑塊內(nèi)一些參與血管生成的細(xì)胞因子如血小板衍生生長因子(PDGF)、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vEGF)及血管細(xì)胞粘附分子(VCAM)、細(xì)胞間粘附分子(ICAM)的表達(dá)，旨在證實(shí)斑塊內(nèi)血管生成對(duì)AS發(fā)生發(fā)展的影響，尤其是EGFL7在AS斑塊內(nèi)的特異性表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)EGFL7在病理性血管生成中的重要作用，為將來以egfl7為基因治療靶點(diǎn)，抑制AS斑塊內(nèi)新生血管形成，增加AS斑塊

2、的穩(wěn)定性提供理論基礎(chǔ)，從而為治療AS、腫瘤等病理性血管生成相關(guān)性疾病，提供新的治療思路和策略。 方法： 收集山東大學(xué)第二醫(yī)院2004年10月至2006年1月腎移植手術(shù)中切除、病理確診、資料完備的臨床病理診斷為動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的髂內(nèi)動(dòng)脈血管標(biāo)本32例為病例組，其中男性20例，女性12例，年齡40-68歲，平均年齡50.19±7.17歲。同時(shí)收集腎臟供體的髂內(nèi)動(dòng)脈標(biāo)本30例設(shè)為對(duì)照組，其中男性26例，女性4例，年齡20-

3、47歲，平均年齡33.13±8.59歲。10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測正常血管及髂動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成標(biāo)本內(nèi)一些血管生成因子如VEGF、PDGF-AA、PDGF-BB及粘附分子ICAM-1及VCAM-1的蛋白表達(dá)水平變化，利用己知的相應(yīng)抗體的陽性切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗體作為陰性對(duì)照。在細(xì)胞胞漿內(nèi)呈棕黃色顆粒，界限清楚，無明顯背景著色者為陽性表達(dá)。每張切片由兩名實(shí)驗(yàn)操作人員雙盲雙測1

4、0個(gè)高倍視野內(nèi)的表達(dá)情況，判斷標(biāo)準(zhǔn)以“-、+”表示。結(jié)果采用x<'2>檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1．對(duì)照組正常血管壁免疫組化染色顯示： 血管壁各層細(xì)胞胞漿內(nèi)未見EGFL7、VEGF、PDGF-AA、PDGF-BB棕黃色顆粒。在30例正常血管標(biāo)本中，其中6例(20％)EC胞漿內(nèi)可見稀疏、淺淡的ICAM-1陽性顆粒，5例(16.7％)EC胞漿內(nèi)可見少量、淺淡的VCAM-1陽性顆粒。 2．實(shí)驗(yàn)組AS標(biāo)本免疫

5、組化染色結(jié)果顯示： (1)29例AS標(biāo)本內(nèi)(90.6％)新生血管的EC胞漿內(nèi)可見EGFL7蛋白表達(dá)棕黃色顆粒，AS斑塊內(nèi)膜面的EC胞漿內(nèi)未見EGFL7蛋白表達(dá)陽性信號(hào)。 (2)30例AS標(biāo)本內(nèi)(93.8％)的新生血管EC胞漿內(nèi)可見VEGF蛋白表達(dá)棕黃色顆粒。 (3)32例AS標(biāo)本內(nèi)的新生血管EC胞漿內(nèi)未見PDGF-AA蛋白表達(dá)棕黃色顆粒，26例標(biāo)本內(nèi)(81.3％)中層泡沫細(xì)胞胞漿內(nèi)可見PDGF-AA蛋白表達(dá)棕黃色

6、顆粒；32例AS標(biāo)本內(nèi)新生血管區(qū)EC胞漿內(nèi)未見PDGF-BB表達(dá)棕黃色顆粒，中層泡沫細(xì)胞胞漿內(nèi)亦未見PDGF-BB蛋白表達(dá)棕黃色顆粒。 (4)31例AS標(biāo)本內(nèi)(96.8％)可見工CAM-1表達(dá)陽性顆粒，主要分布于新生血管EC胞漿內(nèi)，中層亦可見陽性表達(dá)信號(hào)。30例AS標(biāo)本內(nèi)(93.75％)可VCAM-1表達(dá)陽性顆粒，主要分布于新生血管EC胞漿內(nèi)，中層亦可見陽性表達(dá)信號(hào)。 3．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示： (1)動(dòng)脈粥樣硬化

7、組與正常血管組相比，EGFL7表達(dá)陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=51.08，P<0.0001)(見表1)。 (2)動(dòng)脈粥樣硬化組與正常血管組相比，VEGF表達(dá)陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=54.49，P<0.0001)(見表2)。 (3)動(dòng)脈粥樣硬化組與正常血管組相比，PDGF-AA表達(dá)陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=41.98，P<0.0001)(見表3)。 (4)動(dòng)脈粥

8、樣硬化組與正常血管組相比，ICAM表達(dá)陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=38.03，P<0.0001)(見表4)。 (5)動(dòng)脈粥樣硬化組與正常血管組相比，VCAM表達(dá)陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=37.42，P<0.0001)(見表5)。 結(jié)論： 1．正常血管VEGF、PDGF-AA、PDGF-BB不表達(dá)，正常血管EC亦不表達(dá)EGFL7蛋白，正常血管壁可有弱的：ICAM-1及VCAM-1表

9、達(dá)。 2．AS斑塊內(nèi)vEGF、ICAM-1及VCAM-1表達(dá)明顯增高，與斑塊內(nèi)新生血管形成有關(guān)。 3．AS斑塊內(nèi)PDGF-AA表達(dá)水平提高，主要分布于血管壁中層的泡沫細(xì)胞，這是因?yàn)镻DGF-AA主要由分泌型SMC產(chǎn)生，其表達(dá)增加主要參與調(diào)節(jié)SMC的增殖、遷移等，不參與斑塊內(nèi)血管生成。AS斑塊內(nèi)PDGF-BB表達(dá)水平無明顯改變，這是因?yàn)镻DGF-BB主要由EC產(chǎn)生，PDGF-BB參與血管生成，但主要調(diào)節(jié)壁細(xì)胞募集和增殖，而