MicroRNA-200b調(diào)控膀胱癌發(fā)生EMT與Notch信號通路關(guān)系的實驗研究.pdf

1、目的:
　　探討microRNA-200b調(diào)控膀胱癌發(fā)生EMT與Notch信號通路關(guān)系的內(nèi)在分子機制。
　　方法:
　　將has-miR-200b mimics及陰性對照組(scramble)用脂質(zhì)體Lip2000轉(zhuǎn)染膀胱癌T24、5637細胞,通過倒置顯微鏡觀察膀胱癌T24、5637細胞生長及形態(tài)的變化;采用qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率;運用RT-PCR及western blot技術(shù)檢測E-cadherin、N-cad

2、herin、vimentin、alpha-smooth muscle actin、Notch-1、Jagged-1的mRNA及蛋白表達變化;MTT檢測轉(zhuǎn)染后膀胱癌細胞株耐藥性的改變;采用Hoechst染色法檢測抗凋亡能力的改變;細胞凋亡率的改變通過流式細胞學檢測;轉(zhuǎn)染后的膀胱癌細胞株侵襲能力的變化運用transwell來評估。
　　結(jié)果:
　　實驗組的膀胱癌細胞數(shù)量變少,分布更分散,細胞的體積明顯增大,形態(tài)更加不規(guī)則;qRT

3、-PCR結(jié)果示:轉(zhuǎn)染48h后,miR-200b顯著性上調(diào)(P<0.05);RT-PCR及western blot結(jié)果表明:E-cadherin mRNA和蛋白表達顯著上調(diào)(P<0.05),N-cadherin、vimentin、alpha-smooth muscle actin、Notch-1、Jagged-1 mRNA和蛋白顯著下調(diào)(P<0.05);MTT結(jié)果提示:實驗組細胞對順鉑的抵抗力降低(P<0.05);Hoechst33342

4、表明:實驗組的膀胱癌細胞株抗凋亡能力減弱(P<0.05);流式細胞學結(jié)果示:實驗組的早期晚期凋亡率顯著增加,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Transwell表明實驗組膀胱癌細胞的侵襲能力明顯下調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　上調(diào)microRNA-200b能通過抑制Notch-1、Jagged-1的mRNA及蛋白表達,從而阻斷Notch信號通路,進而抑制膀胱癌發(fā)生EMT;同時對膀胱癌細胞的耐藥性、抗凋亡能力、侵襲