類風濕關(guān)節(jié)炎患者的HLA-DR4表型和TNFα-308、TNFRII+196多態(tài)性的作用研究.pdf

1、類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種病因不明的自身免疫性疾病，遺傳、免疫分子調(diào)節(jié)在發(fā)病機制上起著主要作用。研究認為具有特定的HLA抗原者(如HLA-DR4)，當受到外界刺激或發(fā)生自身改變時，HLA的抗原決定簇發(fā)生了改變，借助共同表位和基因劑量效應(yīng)，使具有HLA的有核細胞成為免疫活化的靶子，產(chǎn)生T細胞激活及一系列免疫介質(zhì)如細胞因子的釋放，導致RA發(fā)生。本研究試圖進一步探索HLA-DR4表型與細胞因子腫瘤壞死因子(TNF-α)及其受體(TNFRⅡ)的

2、單核甘酸多態(tài)性(SNP)的相互作用在RA的發(fā)病中的影響。 目的：通過對RA患者HLA-DR4表型和TNFα-308、TNFRⅡ+196的多態(tài)性之間相互作用的研究，探討基因?qū)A患病風險、基因?qū)ο鄳?yīng)的細胞因子濃度和臨床病情指標的影響，從而進一步探索3個基因在RA發(fā)病中的作用。 方法：確定112例RA患者和129例健康對照者為研究對象，首先抽提外周血白細胞的基因組DNA，然后用PCR-SSP檢測HLA-DR4表型和PCR-R

3、FLP檢測TNFα的-308位點和TNFRⅡ的+196位點的多態(tài)性，采用ELISA檢測外周血清TNF-α、sTNFRⅡ濃度，最后收集臨床病情指標資料(包括性別、年齡、病程、休息痛VAS評分、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)、握力、晨僵時間、ESR、CRP、RF、關(guān)節(jié)功能、x線分期)進行分析。 結(jié)果： (1)HLA-DR4表型在RA患者組(50％)與健康者組(26.36％)陽性率的差異有明顯的統(tǒng)計學意義(P=0.000)，HLA-D

4、R4(+)使得患者發(fā)生RA的風險較健康者升高了2.794倍(95％CI：1.630-4.790)，性別的分層分析發(fā)現(xiàn)HLA-DR4(+)使得女性患者發(fā)生RA的風險升高了3.556倍(95％CI：1.811-6.979)。 (2)RA患者組與健康者組的TNFα-308等位基因型AA/GA/GG(0/8/104vs2/23/104，P=0.010)、少見等位基因型(AA+GA)/GG(8/104vs25/104，P=0.006)和等

5、位基因A/G(8/216vs27/231，P=0.004)構(gòu)成比的差異有明顯的統(tǒng)計學意義，TNFα-308少見等位基因型(AA+GA)和等位基因A使得患者發(fā)生RA的風險性較健康者升高3.125倍(95％CI：1.347-7.248)和3.156倍(95％CI：1.403-7.097)。性別的分層分析發(fā)現(xiàn)RA男患者組與男健康者組的TNFα-308等位基因型AA/GA/GG(0/2/34vs1/12/32，P=0.015)、少見等位基因型(

6、AA+GA)/GG(2/34vs13/32，P=0.007)和等位基因A/G(2/70vs14/76，P=0.007)構(gòu)成比的差異有明顯的統(tǒng)計學意義，TNFα-308少見等位基因型(AA+GA)和等位基因A使得男性發(fā)生RA的風險升高了6.906倍(95％CI：1.444-33.031)和6.447倍(95％CI：1.415-29.383)。 (3)RA患者組與健康者組的TNFRⅡ+196等位基因型GG/TG/TT(5/62/45

7、vs9/56/64)、少見等位基因型(GG+TG)/TT(67/45vs65/64)、等位基因G/T(72/152vs74/184)構(gòu)成比的差異沒有明顯的統(tǒng)計學意義，性別的分層分析發(fā)現(xiàn)等位基因型GG/TG/TT在女患者與女健康者之間的差異(3/49/24vs8/28/48，P=0.000)具有明顯的統(tǒng)計學意義；少見等位基因型(GG+TG)/TT在女性患者與女健康者(52/24vs36/48，P=0.001)、男性患者與男健康者(15/2

8、1vs29/16，P=0.041)之間的差異具有明顯的統(tǒng)計學意義，使得女性發(fā)生RA的風險升高2.889倍(95％CI：1.510-5.526)，男性發(fā)生RA的風險降低到0.394倍(95％CI：0.160-0.970)；而等位基因G/T的性別分層差異沒有統(tǒng)計學意義。 (4)HLA-DR4、TNFα-308組成的5種組合基因型中，HLADR4(+)TNFα-308(GG)基因型使得患者發(fā)生RA的風險較HLADR4(-)TNFα-3

9、08(GG)基因型增高2.931倍(95％CI：1.642-5.233)。 (5)HLA-DR4、TNFRⅡ+196組成的6種組合基因型中，HLA-DR4(+)TNFRⅡ+196(TT)基因型與HLA-DR4(+)TNFR11+196(TG)基因型使得患者發(fā)生RA的風險較HLA-DR4(-)TNFRⅡ+196(TT)基因型分別增高2.476倍(95％CI：1.120-5.473)和6.136倍(95％CI：2.548-14.77

10、5)，HLA-DR4(+)TNFRⅡ+196(TG)基因型使得患者發(fā)生RA的風險較HLA-DR4(-)TNFRⅡ+196(TG)基因型增高4.313倍(95％CI：1.851-10.050)。 (6)TNFα-308、TNFRⅡ+196組成的7種組合基因型中，TNFα-308(GA)TNFRⅡ+196(TT)基因型和TNFα-308(GA)TNFRⅡ+196(TG)基因型使得患者發(fā)生RA的風險較TNFα-308(GG)TNFRⅡ

11、+196(TG)基因型分別降低到0.212倍(95％CI：0.056-0.804)和0.282倍(95％CI：0.084-0.945)。 (7)HLA-DR4、TNFα-308、TNFRⅡ+196組成的11種組合基因型中，HLA-DR4(+)TNFα-308(GG)TNFRⅡ+196(TT)基因型和HLA-DR4(+)TNFα-308(GG)TNFRⅡ+196(TG)基因型較HLA-DR4(-)TNFα-308(GG)TNFRⅡ

12、+196(TT)基因型使患者發(fā)生RA的風險升高2.64倍(95％CI：1.124-6.202)和5.8倍(95％CI：2.297-14.646)；HLA-DR4(+)TNFα-308(GG)TNFRⅡ+196(TG)基因型較HLA-DR4(-)TNFα-308(GG)TNFRⅡ+196(TG)基因型使得患者發(fā)生RA的風險性升高了4倍(95％CI：1.637-9.775)。 (8)RA患者組與健康者組的TNF-α濃度(pg/ml)

13、的差別(34.56±21.04vs20.63±15.46，P=0.000)具有統(tǒng)計學意義。特定組合基因型的RA患者與健康者組的血清TNF-α濃度差異具有統(tǒng)計學意義。 (9)RA患者組與健康者組之間的sTNFRⅡ濃度(ng/ml)的差別(8.54±6.29vs5.48±4.41，P=0.000)具有統(tǒng)計學意義。特定組合基因型的RA患者與健康者組的血清sTNFRⅡ濃度差異具有統(tǒng)計學意義。 (10)單一基因型對于RA病情的影響

14、：HLA-DR4(+)與HLA-DR4(-)患者比較，發(fā)病年齡(歲)提早(42.59±14.07vs47.36±10.89，P=0.047)，RF濃度(IU/mL)較高(471.32±435.22vs308.13±331.34，P=0.028)。TNFα-308的2種基因型GA/GG的患者比較沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的差異。 (11)組合基因型對RA病情的影響：HLA-DR4與TNFα-308的組合基因型中，HLA-DR4(+)TN

15、Fα-308(GG)基因型與HLA-DR4(-)TNFα-308(GG)基因型之間相比在發(fā)病年齡(歲)的差異(42.35±14.27vs47.71±10.95，P=0.033)有統(tǒng)計學意義；而TNFRⅡ+196與其它2個基因的兩兩組合的基因型和3個基因組合的基因型，其間的比較只有性別構(gòu)成差異的統(tǒng)計學意義最終保留下來。 結(jié)論： (1)HLA-DR4表型(+)提高了RA患者，尤其是RA女性患者的患病風險。 (2)TN

16、F-α基因-308位點的多態(tài)性提高了RA患者、尤其是RA男性患者的患病風險。 (3)TNFRⅡ基因+196位點的多態(tài)性與RA患者患病風險之間的關(guān)系比較復雜。 (4)特定的HLA-DR4、TNFα-308、TNFRⅡ+196組合基因型改變了RA發(fā)生的風險：TNFα-308(GG)輕微升高、TNFRⅡ+196(TT)輕微降低和TNFRⅡ+196(TG)顯著升高基于HLADR4基礎(chǔ)上的RA患病風險。 (5)血清TNF-