右旋檸烯對人胃癌細胞骨架重構和抗轉(zhuǎn)移作用研究.pdf

1、胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，其病死率居各種惡性腫瘤之首。根治性手術為目前其主要治療手段，但術后復發(fā)和轉(zhuǎn)移率仍較高，也是多數(shù)患者死亡的原因。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤重要的生物學行為，其中腫瘤細胞的遷移運動能力對腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移中扮演著相當重要的角色，而有效遷移行為的達成又來源于胞內(nèi)、外調(diào)節(jié)因子對細胞骨架動力裝置的調(diào)節(jié)，因此針對以細胞骨架為治療靶點的抗腫瘤藥物研究成為新的熱點。右旋檸烯是中藥桔皮中提純的單體成份，屬于天然單萜烯類化合物，具有

2、防治化學致癌物誘導的乳腺癌、皮膚癌、肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌和胰腺癌等作用，其低毒、廣譜和食用性特征使其具有重要的研究價值。目前研究表明右旋檸烯能誘導致癌物代謝的酶類表達，使致癌物解毒、癌癥細胞凋亡、細胞再分化和/或抑制了細胞生長調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)移酶的異丙基化和微淋巴管的形成，但是對其誘導腫瘤細胞骨架重構，抑制細胞遷移運動能力的方面研究未有報道。本研究通過觀察右旋檸烯對人胃癌細胞SGC-7901微絲骨架重構的影響和對F-肌動蛋白交聯(lián)結合蛋白f

3、ascin的研究來為右旋檸烯在臨床的應用提供新的抗腫瘤轉(zhuǎn)移理論依據(jù)。 本課題分兩部分完成: 第一部分 右旋檸烯對人胃癌細胞體外生長增殖和侵襲能力的影響。 目的：探討不同濃度的右旋檸烯對高淋巴結轉(zhuǎn)移人胃癌細胞株（SGC-7901）體外生長和侵襲能力等生物學行為的影響。 方法：1、以MTT比色法檢測不同濃度右旋檸烯對胃癌細胞的細胞毒作用，并確定右旋檸烯相對無毒劑量。2、應用集落形成實驗評價不同濃度右旋

4、檸烯對胃癌細胞增殖潛能的影響。3、用Transwell小室重建基底膜侵襲模型評價不同濃度右旋檸烯對胃癌細胞SGC-7901體外侵襲能力的影響。 結果：1、右旋檸烯0．25mmol/L以上劑量對胃癌細胞具有明顯細胞毒作用，具體量效關系。2、無明顯細胞毒劑量的右旋檸烯能有效抑制胃癌細胞增殖能力，在0．25mmol/L，0．125mmol/L，0．0625mmol/L濃度上集落形成實驗抑制率分別為72．9%：33．3%，6．9%。3、

5、無明顯細胞毒劑量的右旋檸烯能有效抑制胃癌細胞侵襲潛能，在0．25mmol/L，0．125mmol/L，0．0625mmol/L濃度上抑制率分別為57．6%，45．3%，32．1%。 結論：右旋檸烯對胃癌細胞SGC-7901具有明顯的細胞毒作用可顯著抑制其體外生長能力，并具有量效關系。在無明顯細胞毒的劑量下，右旋檸烯能夠有效抑制胃癌細胞體外增殖和侵襲能力，并具有量效關系。 第二部分 右旋檸烯對人胃癌細胞骨架重構及相

6、關蛋白Fascin的研究。 目的：探討右旋檸烯對胃癌細胞（SGC-7901）細胞微絲骨架結構重構影響和fascin與細胞骨架F-肌動蛋白的關系。 方法：1．利用FITC標記的鬼筆環(huán)肽為熒光探針，用激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度右旋檸烯作用后胃癌細胞肌動蛋白細胞骨架（F-actin）重構情況。2．免疫組織化學方法觀察fascin在胃癌中的表達情況。3．蛋白印跡方法定量檢測不同濃度右旋檸烯作用后胃癌細胞fascin表達。

7、 結果：1．右旋檸烯作用后，胃癌細胞微絲骨架明顯發(fā)生重構，微絲纖維結構和分布發(fā)生明顯改變。2．免疫組化顯示58例胃癌組織標本中23例（39．7%）表達陽性，胃癌分化程度越低、腫瘤組織漿膜侵犯陽性、淋巴結轉(zhuǎn)移陽性、胃癌TNM分期高者fascin表達明顯升高，并與病理組織學分型密切相關。3．蛋白印跡法顯示右旋檸烯作用后胃癌細胞fascin含量降低，藥物濃度越高，降低越明顯。 結論：fascin的高表達與胃癌的遠處轉(zhuǎn)移能力密切相關。