應(yīng)用BAC探針對(duì)食管癌染色體3q中基因變化的研究.pdf

1、【目的】食管癌是中國常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生發(fā)展與癌基因的過度表達(dá)和/或抑癌基因的失活有關(guān).應(yīng)用CGH技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),在食管癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中常出現(xiàn)3q擴(kuò)增.由于CGH技術(shù)自身的缺陷,不能發(fā)現(xiàn)小于1Mb的擴(kuò)增,而FISH技術(shù)可以彌補(bǔ)這一缺陷.該研究中選擇位于3q的6個(gè)新基因,包括兩個(gè)候選癌基因:MUC4和Lamp3;兩個(gè)翻譯和復(fù)制相關(guān)的基因:eIF4G1和RFC4;一個(gè)候選抑癌基因:hD1g;一個(gè)p53家族新成員:p63.應(yīng)用FISH技

2、術(shù)研究這些基因在35例食管癌組織、18例癌旁黏膜組織及食管癌EC9706細(xì)胞系中的變化,探討其與食管癌的相關(guān)性,并從中找到與食管癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切的基因.【方法】18例新鮮食管癌組織及癌旁黏膜組織,用Carnoy固定液固定,石蠟包埋,另選取17例食管癌手術(shù)切除,福爾馬林固定的大體石蠟標(biāo)本,連續(xù)切片7張,1張做HE染色,6張做FISH;制備人食管鱗癌EC9706細(xì)胞系和正常人外周血淋巴細(xì)胞中期染色體片;從大腸桿菌中抽提質(zhì)粒DNA,用切口平

3、移法,以生物素-16-dUTP標(biāo)記含目的基因的細(xì)菌人工染色體(BAC),配制雜交液,變性雜交后37℃孵育24小時(shí).雜交完畢,用抗生物素蛋白-異硫氰酸熒光素(avidin-FITC)、羊抗生物素蛋白抗體(BAA)和第二層抗生物素蛋白-FITC檢測(cè),DAPI復(fù)染細(xì)胞核.用連在熒光顯微鏡上的冷電荷藕合設(shè)備相機(jī)獲取兩種熒光的灰圖,灰圖經(jīng)Metamorph圖像系統(tǒng)處理,分別被賦予綠、紅二色,紅色代表細(xì)胞核,綠色代表目的基因信號(hào),計(jì)數(shù)100~200