胃腺癌miR-200a的表達(dá)及其通過wnt-β-catenin信號通路抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、目的：胃癌在我國仍居消化道惡性腫瘤發(fā)病率的前列，是世界上死亡率較高的惡性腫瘤，目前胃癌的治療方法很多，但療效不能令人滿意。因此，從分子水平揭示胃癌的發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，有助于解決手術(shù)和放化療等傳統(tǒng)治療方法的缺陷，為惡性腫瘤的治療提供新的方向。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是上皮細(xì)胞通過特定的程序轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)過程。在胚胎發(fā)育過程中，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化能促進(jìn)組織重塑，還可以促進(jìn)

2、創(chuàng)傷的愈合。與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和凋亡有密切的關(guān)系。組織或器官發(fā)生EMT后，上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-鈣粘蛋白(E-cadherin)等表達(dá)下調(diào)，間葉表型標(biāo)記物N-鈣粘蛋白(N-cadherin)等表達(dá)上調(diào)。明確EMT在胃癌發(fā)病中的作用，為胃癌的治療提供依據(jù)。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類廣泛存在于動植物的內(nèi)源性小分子非編碼RNA。miRNAs通常與靶mRNAs的3'非翻譯區(qū)(3'-untranslated region，3'-

3、UTR)互補(bǔ)結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因的表達(dá)。miRNAs調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、分化以及遷移等重要的生物。miRNA的表達(dá)和代謝異常與多種疾病密切相關(guān)，miRNA應(yīng)用于惡性腫瘤的診斷和治療成為研究的熱點(diǎn)。
　　 方法：⑴分別采用原位雜交檢測64例不同級別胃癌組織和10例正常胃粘膜組織miR-200a、miR-200b和miR-200c的表達(dá)。⑵免疫組化檢測64例不同級別胃癌組織和10例正常胃粘膜組織中EMT相關(guān)蛋白ZEB1/ZE

4、B2、E-cadherin、N-caderin、β-catenin、Twist和Snail2的表達(dá)。并比較miR-200a的表達(dá)與EMT相關(guān)蛋白ZEB1/ZEB2、E-cadherin、N-caderin和β-catenin等表達(dá)的關(guān)系。體外將miR-200a mimics及陰性對照scramble通過Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染胃腺癌細(xì)胞系SGC7901，通過共聚焦免疫熒光的方法檢測三組ZEB1、ZEB2、E-cadheri

5、n、N-cadherin、β-catenin等表達(dá)變化。分析miR-200a調(diào)控EMT的機(jī)制。⑶體內(nèi)實(shí)驗(yàn)則通過建立裸鼠皮下胃癌動物模型，將裸鼠分為三組，control組、scramble組、miR-200a組，分別將瘤內(nèi)注射oligofectamine和Lipofectamine2000的混合物，動態(tài)觀察腫瘤生長狀況，免疫組化分別檢測三組EMT相關(guān)蛋白ZEB1/ZEB2、E-cadherin、N-caderin、β-catenin等的表

6、達(dá)變化。
　　 結(jié)果：①原位雜交結(jié)果顯示，miR-200a、miR-200b和miR-200c在胃腺癌的表達(dá)明顯低于正常胃粘膜，隨著病理級別的增高，miR-200a、miR-200b和miR-200c的表達(dá)逐漸下調(diào)。②免疫組化結(jié)果顯示，ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-catenin、Twist和Snail在胃癌中的表達(dá)明顯高于正常胃粘膜，E-cadherin的表達(dá)則低于正常胃粘膜。隨著病理級別的增高，ZEB1/ZE

7、B2、N-cadherin、β-catenin、Twist和Snail2的表達(dá)逐漸增高，E-cadherin的表達(dá)逐漸降低。免疫熒光結(jié)果顯示，與在control組和scramble組比較，ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-catenin、Twist和Snail2在control組和scramble組中的表達(dá)明顯高于miR-200a組，E-cadherin在control組和scramble組中的表達(dá)明顯低于miR-200a組

8、。③成功建立SCG7901胃癌裸鼠皮下荷瘤模型后，每4天測量一次腫瘤體積，較control組和scramble組，miR-200a組腫瘤生長緩慢，應(yīng)用免疫組化法檢測三組腫瘤標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-cateninTwist和Snail2在control組和scramble組中的表達(dá)明顯高于miR-200a組，E-cadherin在control組和scramble組中的表達(dá)明顯低于miR-200a組。體內(nèi)外

9、結(jié)果一致。
　　 結(jié)論：⑴在胃癌中，miR-200a表達(dá)降低，EMT相關(guān)蛋白N-cadherin，β-catenin等表達(dá)增加，E-cadherin表達(dá)減少，激活wnt/β-catenin信號通路。⑵miR-200a轉(zhuǎn)染SGC7901后，能夠有效增加miR-200a的表達(dá)，抑制EMT的可能機(jī)制是可能機(jī)制是miR-200a靶向于ZEB1/ZEB2，游離β-catenin降低，抑制wnt/β-catenin信號通路。⑶裸鼠皮下荷瘤模