ALLN、UPFⅡ單用及聯(lián)用對(duì)去血清饑餓誘導(dǎo)大鼠骨骼肌細(xì)胞凋亡降解的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:探討鈣蛋白酶抑制劑ALLN（N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal）與外源性泛素-蛋白酶體片段Ⅱ（Ubiquitin/Proteasome FractionⅡ,UPFⅡ）單用及聯(lián)用對(duì)去血清饑餓大鼠骨骼肌細(xì)胞凋亡降解的影響及其可能機(jī)制。
　　方法:離體培養(yǎng)3-5日齡SD大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，倒置顯微鏡下適時(shí)觀察、拍照、記錄骨骼肌細(xì)胞的生長狀態(tài)；采用HE染色以及骨骼肌肌動(dòng)蛋白單克隆抗體(α-sarcometric

2、 actin)免疫熒光方法鑒定骨骼肌細(xì)胞，待細(xì)胞培養(yǎng)成熟穩(wěn)定后調(diào)整濃度，隨機(jī)分為5組：（1）A組(完全培養(yǎng)基對(duì)照組)，（2）去血清饑餓系列：B組(單純基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)照組)、C組(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+UPFⅡ組)、D組(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+UPFⅡ+ALLN組)、E組(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+ALLN組)；采用噻唑藍(lán)（MTT）法測定各組細(xì)胞在藥物干預(yù)72h后的生存率，采用適時(shí)熒光定量PCR法檢測各組細(xì)胞在藥物干預(yù)72h后Calpain-3、MuRF-1、Atrogin

3、-1在mRNA水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1. MTT結(jié)果分析顯示：與完全培養(yǎng)基A組比較，去血清饑餓B、C、D、E組細(xì)胞生存率分別為（57.89％±5.07%）、（41.22%±4.87%）、(56.94%±6.02%)、（69.72%±6.25%），各組生存率均下降（P<0.05)；E組細(xì)胞生存率較B、C、D組均高（P<0.05）；D組生存率較C組高（P<0.05）；B組與D組之間無明顯差異（P>0.05）。
　　2.實(shí)時(shí)

4、熒光定量PCR結(jié)果顯示：與A組比較，去血清饑餓B、C、D、E組細(xì)胞Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1的mRNA表達(dá)量分別為23.71±0.10/23.18±0.08/22.22±0.10倍、24.52±0.07/24.10±0.07/23.29±0.05倍、23.78±0.07/23.11±0.05/22.15±0.07倍、22.60±0.04/22.37±0.10/21.65±0.08倍，差異性均顯（P<0.05）；