脂氧合酶在四種細胞系的表達及SV-HUC細胞中介導聯(lián)苯胺氧化應激.pdf

1、[目的]：研究四種人正常細胞系(SV-HUC、HBE、HTR-8、HaCat)脂氧合酶同工酶蛋白表達及誘導表達情況，并比較5-LOX與CYP1B1/2E1蛋白表達水平;同時探討聯(lián)苯胺(BZD)對其致癌主要的靶細胞人膀胱上皮細胞（SV-HUC）的氧化應激作用及5-LOX對其作用的影響;為LOX協(xié)同氧化外源性化學物及其損傷提供進一步的線索。
　　[方法]：①蛋白印跡法測定5-LOX、12-LOX、15-LOX-2、CYP1B1、CYP

2、2E1蛋白表達水平;②以SV-HUC細胞為氧化應激研究目標細胞，不同濃度BZD(50、100、200μmol)染毒SV-HUC細胞24h，采用熒光分光光度計測定細胞內(nèi)ROS水平，分光光度計超氧歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和抗氧化劑(GSH)含量的變化，酶標儀檢測細胞內(nèi)丙二醛(MDA)的含量;同時測定5-LOX特異性抑制劑AA861對上述氧化應激指標的影響。
　　[結(jié)果]：①四種正常細胞中均有5-LOX、15-LOX-2的

3、表達，苯并(a)芘、BZD可誘導5-LOX表達增加;SV-HUC細胞中5-LOX蛋白表達水平與CYP2E1相差不大，高于CYP1B1;在正常HBE、HaCat、HTR-8細胞中，5-LOX蛋白表達水平低于CYP1B1;②BZD可誘導SV-HUC細胞內(nèi)ROS水平、CAT酶活力及MDA含量增加，BZD為100、200μmol/L時ROS和CAT活力顯著增加(p＜0.05)，200μmol/L BZD時MDA增加具有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)

4、，細胞內(nèi)SOD酶活力隨著BZD濃度增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(p＜0.05)，細胞內(nèi)GSH含量隨著毒物濃度升高而下降，BZD為200μmol/L時降低具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);預先使用不同濃度的抑制劑AA861的高濃度BZD組，AA861對上述氧化應激指標起到保護作用，以濃度為10μmol/L的AA861較好。
　　[結(jié)論]：5-LOX可能是上述四種人正常細胞系中協(xié)同氧化外源性化學物的主要的LOX同工酶;5-LOX抑制劑AA