鈣泊三醇對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞S100A8表達(dá)的影響.pdf

1、學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：20060lOll鈣泊三醇對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞S1ooA8表達(dá)的影響專業(yè)年級(jí)：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2006級(jí)姓名：吳大維導(dǎo)師：晉紅中(教授)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院(北京協(xié)和醫(yī)院)皮膚科完成日期：2014年6月摘要一研究背景及目的銀屑病是一類常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病，皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的異常增殖和分化是銀屑病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。人體皮膚是維生素D的合成場(chǎng)所，維生素D及其類似物鈣泊三醇也可以作用于角質(zhì)形成細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞增

2、殖、分化和凋亡。同時(shí)在角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)，抗菌肽S100A7、S100A8、S100A9可以與IL一17、IL_l、TNF—Q等炎癥因子相互促進(jìn)，引起細(xì)胞異常增殖與分化，導(dǎo)致銀屑病發(fā)病；已有研究證實(shí)維生素D可以通過(guò)拮抗S100A7表達(dá)減輕皮膚炎癥反應(yīng)，從而治療銀屑病?；诖?，維生素D及其類似物是否可能通過(guò)影響角質(zhì)形成細(xì)胞S100A8的表達(dá)而參與銀屑病的病理生理過(guò)程本課題以體外培養(yǎng)的永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞系為對(duì)象，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PC

3、R的方法研究鈣泊三醇對(duì)細(xì)胞內(nèi)S100A8蛋白表達(dá)的影響。二研究方法(1)HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)：使用含10％FBS及抗生素的她M—EBSS培養(yǎng)基常規(guī)體外培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞并傳代。(2)TNF—Q與鈣泊三醇對(duì)HaCaT細(xì)胞的干預(yù)：最后一次傳代后細(xì)胞融合達(dá)80～90％時(shí)分為四組，空白對(duì)照組不加入任何藥物干預(yù)，TNF—Q組加入100ng／ⅢlTNF—Q，鈣泊三醇組加入10岣M～10叫M濃度梯度的鈣泊三醇，鈣泊三醇TNF—Q組在100ng／mlTN

4、F—Q的基礎(chǔ)上再加入101M～10嘲鈣泊三醇，上述細(xì)胞共同孵育24h。(3)HaCaT細(xì)胞內(nèi)S100A8表達(dá)水平檢測(cè)：細(xì)胞成分提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用RT—PCR方法擴(kuò)增目的基因S100A8及內(nèi)參B—actin片段并行1％瓊脂糖凝膠電泳；使用同樣的cDNA及引物通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR的方法擴(kuò)目的基因s100A8及內(nèi)參O—actin片段，用2?！鳌ㄓ?jì)算各樣本S100A8相對(duì)表達(dá)量，并用單因素方差分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較各組間Sloo

5、A8表達(dá)的差異。三研究結(jié)果(1)S100A8擴(kuò)增產(chǎn)物為長(zhǎng)度250bp左右的單一片段，B—actin擴(kuò)增產(chǎn)物為長(zhǎng)度130bp左右的單一片段；(2)100ng／mlTNF一Ⅱ處理體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞24h后，S100A8表達(dá)較空白對(duì)照上調(diào)1962倍(尺001)；(3)101M、10州M鈣泊三醇處理細(xì)胞24h后，S100A8表達(dá)分別較空白對(duì)照上調(diào)5029、2848倍(尺O01)；(4)10咄M、10。6M及10叫M鈣泊三醇處理細(xì)胞24h后