非小細胞肺癌的EGFR基因突變與擴增狀況及信號傳導蛋白AKT、ERK、STAT磷酸化表達.pdf

1、 分類號： 分類號：R655.3 學校代碼： 學校代碼：10392 學科專業(yè)代碼： 學科專業(yè)代碼：100210 學 號： 號：200802057 福 建 醫(yī) 科 大 學 博 士 研 究 生 畢 業(yè) 論 文 非小細胞肺癌的 非小細胞肺癌的 EGFR EGFR 基因突變與擴

2、增狀況及 基因突變與擴增狀況及 信號傳導蛋白 信號傳導蛋白 AKT AKT、ERK ERK、STAT STAT 磷酸化表達 磷酸化表達 The situations of EGFR mutation and amplification and the phosphorylation expressions of signaling protein AKT, ERK, STAT in Non-small cell lung cancer

3、學 位 類 型 ： 型 ： 醫(yī)學博士 醫(yī)學博士 所 在 學 院 ： 院 ： ?？??？偱R床 臨床醫(yī)學院 學院 研 究 生： 生： 賴繁彩 賴繁彩 學 科 學 科 、 專 業(yè) ： 專 業(yè) ： 外科學（胸心外） 外科學（胸心外） 導 師： 師： 陳龍 陳龍 教授 教授 研究起 研究起止日期： 止日期： 2010 2010 年 06 06 月至 月至 2012 2012 年

4、 03 03 月 答 辯 日 期 ： 答 辯 日 期 ： 2012 2012 年 06 06 月 01 01 日 二○一二 ○一二年六月 目錄 目錄 中文摘要 中文摘要 ................................ ................................................... ................... 錯誤 錯誤!未定義書簽。 未定義書簽。 英文摘要 英文

5、摘要 .................................................................... 3 縮略詞簡表 縮略詞簡表 .................................................................. 5 第一章 第一章 前 言 .................................................

6、............. 6 第二章 第二章 實驗內(nèi)容 實驗內(nèi)容 ............................................................ 9 1 標本來源與處理 ......................................................... 9 1.1 標本來源 ......................................

7、................... 9 1.2 標本處理 ......................................................... 9 2 EGFR 基因 19、21 外顯子突變檢測 ......................................... 9 2.1 主要試劑與儀器 ...........................................

8、........ 9 2.1.1 主要實驗試劑及儀器 ......................................... 9 2.1.2 常用溶劑的配置 ............................................ 10 2.2 石蠟組織 DNA 抽提 ................................................ 10 2.3 聚合酶鏈反應(P

9、CR)進行 EGFR 基因擴增 .............................. 11 2.3.1 PCR 引物設計 .............................................. 11 2.3.2 PCR 擴增 .................................................. 12 2.3.3 PCR 產(chǎn)物電泳 ................

10、.............................. 13 2.3.4 PCR 產(chǎn)物純化 .............................................. 13 2.3.5 PCR 產(chǎn)物片段測序反應 ...................................... 13 2.3.6 ABI 測序儀測序及判讀 ...................................

11、... 14 3 EGRR 基因擴增檢測 ..................................................... 14 3.1 FISH 檢測的原理 ................................................. 14 3.2 主要試劑及儀器 .................................................. 14 3

12、.2.1 主要實驗試劑及儀器 ........................................ 14 3.2.2 FISH 檢測常用試劑配置方法 ................................. 15 3.3 實驗方法與步驟 .................................................. 16 3.3.1 石蠟切片預處理 ................

13、............................ 16 3.3.2 雜交儀變性雜交 ............................................ 16 3.3.3 石蠟切片洗滌與觀察 ........................................ 16 3.3.4 結果判斷標準 ..............................................

14、 17 4 EliVisionTM plus 兩步法免疫組織化學染色檢測 p-Akt、p-ERK1/2 和 p-STAT3 的表達....................................................................... 18 4.1 免疫組織化學技術（immunohistochemistry,IHC）的原理 .............. 18 4.2 主要試劑及儀器 ..

15、................................................ 18 4.2.1 主要實驗試劑及儀器 ........................................ 18 4.2.2 主要實驗試劑的配置 ........................................ 19 4.3 實驗方法與步驟 ..............................

16、.................... 19 4.4 結果判斷 ........................................................ 21 5 統(tǒng)計學處理 ............................................................ 21 第三章 第三章 結 果 ....................................