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文檔簡介
1、南華大學(xué)碩士學(xué)位論文FXR1P相互作用RNA的文庫篩選姓名:喻長順申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:何淑雅20070501IVAbstractObjective:FragileXsyndrome(FXS)isoneofthemostcommonfmofinheritedcognitiveimpairmentwhichhaveadiversityofclinicalmanifestation.Themutationof
2、FMR1causesFXS.FXR1agenethatsharesgreatsimilaritywithFMR1(FragileXrelatedgene1)isahousekeepinggenethatplaysanimptantroleinthedevelopmentprocessofnervoussystemmuscularsystem.FXR1P(FragileXrelatedprotein1)thetranslationalpr
3、oductofFXR1isakindofRNAbindingproteinbutourknowledgeaboutFXR1PtargetingRNAsisextremelylimited.TherefewescreenedfromahumanbraingyrushippocampipRH3cDNAlibraryfFXR1PinteractingRNAsindertoenrichourknowledgeaboutthefunctionof
4、FXR1.Methods:ConstructhumanbraingyrushippocampipRH3cDNAlibrary.TheFXR1PwholelongcodingvectpYESTrp3FXR1wasintroducedintohoststrainL40ura3pHybLexZeoMS2;ThenthetoxicityselfactivationofpYESTrp3FXR1weretested;Thehumanbrainlib
5、rarywasscreeningbyyeasttransfmation;TheplasswereextractedfromtheobtainedpositiveyeastclonesreintroducedintoyeaststrainL40ura3pHybLexZeoMS2pYESTrp3FXR1onebyonesoastovalidatetheRNAproteininteractions;Thefragmentsofidentifi
6、edpositiveclonesweresequencedanalyzedwithBLASTinNCBI.Results:ThehumanbraingyrushippocampipRH3cDNAlibrarywassuccessfullyconstructedTheintroductionofpYESTrp3FXR1washarmlesstothehoststraintherewasnoselfactivation56strainsof
7、positiveresultswereobtainedthroughyeastthreehybridscreeningnineofthemwereverifiedbyonetooneyeastthreehybridsystemanalysisThenineclonesweresequencedthenconfmedbyBLASTanalysisfourofthemprovedtobeedcrectlynamelyHomosapienst
8、ubulinalphaubiquitous(KALPHA1)、HomosapiensIQmotifcontainingE(IQCE)、Homosapiensdipeptidylpeptidase7(DPP7)、Homosapiensleukocytereceptcluster(LRC)member4whilefiveofthemwereedreversely.OurfindingsmaycastanewlightonFXR1Pfunct
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