流感病毒致心臟發(fā)育異常的表觀遺傳分子機(jī)制研究.pdf

1、先天性心臟病（先心?。┦且活悋?yán)重危害人類健康的疾病，在新生兒中的發(fā)生率為4.05～12.3‰。環(huán)境因素與遺傳因素是先天性心臟病發(fā)生的主要原因。其中，孕早期宮內(nèi)病毒感染是最為重要的環(huán)境因素之一。臨床流行病學(xué)調(diào)查表明，有15種病毒的早期宮內(nèi)感染可能會(huì)引起心臟發(fā)育異常，進(jìn)而導(dǎo)致先心病的發(fā)生。近年來關(guān)于先天性心臟病的發(fā)生的遺傳機(jī)制取得了許多進(jìn)展，但是目前對(duì)病毒引起先天性心臟病的分子發(fā)生機(jī)制還不清楚。
　　本研究以BALB/c小鼠作為模式動(dòng)

2、物，在小鼠胚胎發(fā)育E7.5天通過鼻腔滴加的方法對(duì)孕母鼠進(jìn)行H1N1流感病毒感染，構(gòu)建H1N1流感病毒小鼠模型。通過數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)篩選，發(fā)現(xiàn)在感染流感病毒后胚胎心臟的表觀遺傳相關(guān)基因表達(dá)出現(xiàn)差異。選取BAF染色質(zhì)重塑復(fù)合物及其信號(hào)途徑為研究對(duì)象，從RNA以及蛋白水平驗(yàn)證分析BAF染色質(zhì)重塑相關(guān)基因及其下游Wnt信號(hào)和部分心臟發(fā)育關(guān)鍵基因的表達(dá)變化。
　　本文得到了以下研究結(jié)果:
　　1、利用數(shù)字化表達(dá)譜技術(shù)分析病毒組和正常

3、組中表觀遺傳相關(guān)基因的表達(dá)情況，并進(jìn)行篩選，經(jīng)RT-PCR半定量分析發(fā)現(xiàn)25個(gè)表觀遺傳相關(guān)基因的結(jié)果與表達(dá)譜的結(jié)果一致，其中11個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，14個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。
　　2、表觀遺傳相關(guān)基因中BAF染色質(zhì)重塑復(fù)合物出現(xiàn)顯著性差異表達(dá)，并篩選出BAF染色質(zhì)重塑基因及其下游Wnt信號(hào)和部分心臟發(fā)育關(guān)鍵基因進(jìn)行進(jìn)一步研究。
　　3、對(duì)BAF染色質(zhì)重塑相關(guān)基因進(jìn)行RT-PCR半定量分析，以E11.5天的胚胎心臟為材料，得到一致的RT

4、-PCR結(jié)果:11組基因結(jié)果與表達(dá)譜的結(jié)果一致，并且都是下調(diào)的。
　　4、對(duì)Wnt信號(hào)下游基因進(jìn)行蛋白表達(dá)水平分析，發(fā)現(xiàn)在病毒組中Sfrp2和Gata4的表達(dá)與數(shù)字表達(dá)譜的結(jié)果一致，均出現(xiàn)了下調(diào)。
　　本論文利用數(shù)字化表達(dá)譜技術(shù)篩選到在H1N1流感病毒感染孕鼠的胚胎心臟中表觀遺傳相關(guān)基因出現(xiàn)了顯著差異表達(dá)。并且BAF染色質(zhì)重塑復(fù)合物及其下游Wnt信號(hào)和部分心臟發(fā)育關(guān)鍵基因的表達(dá)也出現(xiàn)下調(diào)。提示表觀遺傳染色質(zhì)重塑基因及其信號(hào)途