侵染花生的辣椒褪綠病毒生物學(xué)性質(zhì)及病毒基因組S RNA全序列研究.pdf

1、病毒病是花生上的重要病害，花生病毒病在我國(guó)花生產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，是影響花生高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要限制因素之一。在我國(guó)，侵染花生的病毒有花生條紋病毒(PStV)、花生矮化病毒(PSV)、黃瓜花葉病毒(CMV)。此外，在我國(guó)南方的廣東、廣西花生產(chǎn)區(qū)，普遍發(fā)生一種番茄斑萎病毒屬成員引起的病毒病害，該病毒侵染花生后，最初引起花生葉片出現(xiàn)褪綠黃斑和枯斑，發(fā)病葉片逐漸枯死，隨后向頂芽發(fā)展，引起頂芽枯死，導(dǎo)致整株花生嚴(yán)重矮化，直至死亡；早期感染花生病株顆粒無(wú)收。

2、在部分田塊，發(fā)病率在10％以上，因此該病害將是影響我國(guó)(特別是南方)花生生產(chǎn)的潛在因子之一。本研究對(duì)該病毒病原進(jìn)行了系統(tǒng)生物學(xué)特性鑒定和病毒基因組S RNA全序列分析，明確該病原為辣椒褪綠病毒(CaCV)的一個(gè)新株系，定名為中國(guó)花生(CP)株系，這是CaCV在中國(guó)發(fā)生和侵染花生的首次報(bào)道。主要結(jié)果如下： 1．2004-2005年調(diào)查發(fā)現(xiàn)，辣椒褪綠病毒引起的花生病害在廣東省廣州市郊和東源縣部分鄉(xiāng)花生產(chǎn)地均有發(fā)生，病害發(fā)病率在1％左

3、右，部分花生地發(fā)病率達(dá)5％。發(fā)病花生葉片和頂芽壞死、植株矮小、不結(jié)莢果，對(duì)花生產(chǎn)量造成嚴(yán)重?fù)p失。 2．CaCV-CP寄主范圍廣，在供試的31種植物中，CaCV-CP能系統(tǒng)侵染18種植物，包括花生、菜豆、大豆、豌豆、綠豆、白羽扇豆、決明、田菁、普通煙、黃煙、心葉煙,歐氏煙、白氏煙、番茄、矮牽牛、蔓陀羅、辣椒、瓜豆，產(chǎn)生環(huán)狀黃斑、枯斑、壞死和花葉等癥狀。局部侵染6種植物，包括莧色藜、昆諾黎、千日紅、豇豆、洋豇豆和望江南，在接種葉上產(chǎn)

4、生褪綠斑、環(huán)斑和壞死癥狀。該病毒不侵染蠶豆、木豆、鷹嘴豆、百日草、黃瓜、芝麻和長(zhǎng)春花。 3．CaCV-CP失毒溫度為45℃-50℃；稀釋限點(diǎn)為10<'-3>-10<'-4>、體外存活時(shí)間為5-6 h。病毒粒體為球形，大小80-100 nm，被一層膜包裹。 4.用改進(jìn)的方法進(jìn)行提取了CaCV-CP，提純的CaCV病毒通過(guò)免疫新西蘭大白兔制備了病毒特異性多克隆抗血清，抗血清效價(jià)1:1000(用ELISA方法測(cè)定)。間接ELI

5、SA實(shí)驗(yàn)表明，CaCV-CP與花生芽壞死病毒(GBNV)及西瓜銀色斑駁病毒(WSMoV)抗血清有弱陽(yáng)性反應(yīng)，與番茄斑萎病毒(TSWV)抗血清無(wú)反應(yīng)。 5.用纖維素CF-11從發(fā)病的歐氏煙葉片中提取CaCV-CP雙鏈RNA，以病毒雙鏈RNA為模板，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增，獲得了CaCV-CP基因組S RNA片段全長(zhǎng)序列，S RNA全長(zhǎng)有3399個(gè)核苷酸(nt)。經(jīng)分析該全長(zhǎng)序列包含各66 nt的5’和3，端非編碼區(qū)(UTR)、132

6、0個(gè)nt的非結(jié)構(gòu)蛋白(NSs)基因、828個(gè)nt的核衣蛋白(N)基因和1119個(gè)nt的Introgenic region(IGR)區(qū)域。NSs基因編碼一個(gè)推測(cè)有439個(gè)氨基酸的NSs蛋白，分子量為49，854 Da。N基因編碼一個(gè)推測(cè)有275個(gè)氨基酸的N蛋白，分子量為30 724 Da。S RNA全序列已登錄到GenBank(登錄號(hào)：DQ355974)。 6.CaCV-CP與已報(bào)道的CaCV泰國(guó)和澳大利亞株系N基因長(zhǎng)度均為828

7、 nt，核苷酸序列和氨基酸序列同源性分別為84.7％～86.4％和92.4～93.1％；與屬于同一血清組的WSMoV、GBNV、WBNV和CCSV 4種病毒N基因核苷酸和氨基酸序列同源性分別為63.5％～79.8％和64.6％～82.6％；與Tospovirus其它血清組(型)11種病毒N基因核苷酸序列同源性低于61％，氨基酸序列同源性低于60％。CaCV-CP與泰國(guó)CaCV-AIT株系NSs基因長(zhǎng)度均為1320 nt，核苷酸和氨基酸序