探討TRPV1受體對受體對M2型巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用及吳茱萸堿的干預(yù)作用.pdf

1、背景：近年來的研究證實(shí)，在高血壓、冠心病等心血管疾病發(fā)生與發(fā)展的不同階段，炎癥是一個(gè)主要的、共同的病理生理學(xué)特征。心血管疾病往往是一種以血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、單核/巨噬細(xì)胞浸潤為特征的慢性炎癥反應(yīng)性疾病。因此控制炎癥可能是當(dāng)今治療這些疾病的有前途的方法之一。目前研究表明，瞬時(shí)受體電位香草醛亞型1受體（TRPV1）能夠抑制炎癥，在炎癥狀態(tài)下對機(jī)體有保護(hù)作用。中藥吳茱萸作為治療心血管疾病的常用中藥已有一定歷史，多方面的研究結(jié)果提示其有效成分吳茱

2、萸（EVO）可能為 T R P V1受體激動(dòng)劑。因此，進(jìn)一步揭示 T RV1受體在炎癥中的作用，探討 TRPV1受體對 M2型巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用及吳茱萸堿的干預(yù)作用，對心血管疾病等慢性炎癥反應(yīng)性疾病的治療具有重要的臨床意義。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)在人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）培養(yǎng)模型上，利用白介素-4（IL-4）誘導(dǎo) THP-1分化為 M2型巨噬細(xì)胞，通過觀察 TRPV1受體對 M2型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)的影響，以及吳茱萸堿

3、對該過程的影響作用，從而闡明TRPV1受體對 M2型巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用及吳茱萸堿的干預(yù)作用，為進(jìn)一步揭示 T RP V1受體及吳茱萸堿的抗炎作用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)：將對數(shù)生長期的THP-1以3×105個(gè)/孔密度鋪細(xì)胞于6孔板，以2ml RPMI1640＋10％FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)。待細(xì)胞長至80%以上開始進(jìn)行分組加藥刺激，具體分組如下：
　　1）Vehicle組：加入 vehicle使其終濃

4、度為1/2000;
　　2）IL-4組：加入 IL-4使其終濃度為10ng/ml;
　　3）CAP+IL-4組：分別加入Capsaicin和IL-4使其終濃度分別10umol/L和10ng/ml;
　　4）CAPZ+CAP+IL-4組：分別加入 Capsazepin、Capsaicin和IL-4使其終濃度分別為10umol/L、10umol/L和10ng/ml;
　　5）EVO+IL-4組：分別加入 EVO和IL

5、-4使其終濃度分別為10umo l/L和10ng/ml;
　　6）CAPZ+EVO+ IL-4組：分別加入 Capsazepin、EVO和IL-4使其終濃度分別為10umol/L、10umol/L和10ng/ml;
　　各組細(xì)胞在37℃5％C02條件下培養(yǎng)12 h。培養(yǎng)處理后，取上清液及細(xì)胞成分，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測定。
　　2.觀察指標(biāo)
　　1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（E LIS A）檢測 T GF-β1的產(chǎn)生;
　

6、　2）RT-PCR檢測細(xì)胞目的基因 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表達(dá);
　　3) Western blot檢測 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測 TGF-β1的產(chǎn)生：與 Vehic le組相比，經(jīng) IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞，其細(xì)胞因子 TGF-β1的產(chǎn)生明顯增加，利用 C AP特異性激活

7、TRP V1受體后能明顯降低 TGF-β1的產(chǎn)生，且該作用可被 TRPV1受體拮抗劑CAPZ部分拮抗。
　　2. RT-PCR檢測細(xì)胞目的基因 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表達(dá)：與 Ve hic le組相比，經(jīng) I L-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞，其表面特定標(biāo)志分子 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表達(dá)明顯增加，利用 CAP特異性激活 TRPV1受體后能明顯降低

8、Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表達(dá)水平，且該抑制作用可被 TRPV1受體拮抗劑 CAPZ所拮抗。
　　3. Western blot檢測 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表達(dá)：與 Ve hic le組相比，經(jīng) I L-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞，其表面特定標(biāo)志分子 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表達(dá)明顯增加，利用 CAP特異性激活 TRPV1

9、受體后能明顯降低 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表達(dá)水平，且該抑制作用可被 TRPV1受體拮抗劑 CAPZ所拮抗。
　　4.通過吳茱萸堿干預(yù)后可明顯降低 I L-4所誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞的功能，其主要表現(xiàn)為 TGF-β1產(chǎn)生下降、Arginase-1、Mannose Receptor mRNA和蛋白表達(dá)水平下降，并且該抑制作用可被 TRPV1受體拮抗劑 CAPZ所拮抗。
　　結(jié)論：
　　1

10、.在 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)模型上，激活 TRPV1受體后能明顯降低 IL-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)，且該作用可被 T RP V1受體拮抗劑所阻斷，提示 T RP V1受體可調(diào)控 M2型巨噬細(xì)胞的功能。
　　2.在 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)模型上，吳茱萸堿能明顯降低 I L-4誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)，且該作用可被 TRP V1受體拮抗劑所阻斷，提示吳茱萸堿可能通過激活 T RP V1受體調(diào)控 M2型巨噬細(xì)胞的