探索非裔美國(guó)人外周血中預(yù)測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎影像學(xué)嚴(yán)重程度的標(biāo)志物.pdf

1、目的:
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthrtitis，RA)患者的臨床表型從輕微關(guān)節(jié)炎癥到嚴(yán)重關(guān)節(jié)破壞具有明顯的個(gè)體差異。在疾病早期即出現(xiàn)關(guān)節(jié)侵蝕的患者往往更快進(jìn)展為關(guān)節(jié)破壞、功能障礙甚至死亡。早期接受積極強(qiáng)化和個(gè)體化的治療，能在很大程度上限制關(guān)節(jié)破壞并減緩疾病進(jìn)程。然而，目前人們對(duì)影響患者出現(xiàn)差異表型的因素理解不足，臨床上也沒(méi)有可靠的生物學(xué)標(biāo)記物用于預(yù)測(cè)和識(shí)別快速發(fā)展成為嚴(yán)重關(guān)節(jié)破壞的高風(fēng)險(xiǎn)人群。探索影響RA疾病

2、嚴(yán)重程度的因素在各種族尤其是非裔美國(guó)人群中的研究較少。因此，本研究的目的是通過(guò)檢測(cè)非裔美國(guó)人外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood MononuclearCells，PBMCs)中基因表達(dá)水平，探索預(yù)測(cè)RA影像學(xué)嚴(yán)重程度的生物標(biāo)志物。
　　方法:
　　本研究分三個(gè)部分:
　　(1)免疫相關(guān)基因表達(dá)譜分析。選取40名在病程和影像學(xué)嚴(yán)重程度方面具有極端表型的RA患者及20名健康對(duì)照者，采集外周血標(biāo)本，用PAXg

3、ene Blood RNA Kit提取外周血中總RNA并通過(guò)Agilent RNA6000 Nano Kit檢測(cè)RNA的質(zhì)量和濃度，然后用High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后使用QIAGEN RT2 Profiler PCR Arrays System通過(guò)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative real-time PCR，qPCR)檢測(cè)上述60

4、個(gè)樣本的免疫相關(guān)基因表達(dá)譜，并進(jìn)行基因的信號(hào)通路富集分析;
　　(2)小樣本驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。根據(jù)關(guān)節(jié)破壞程度選取70名RA患者（分為輕、中、重三個(gè)組）及48名健康對(duì)照者，用同樣的方法提取PBMCs RNA標(biāo)本，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用TaqMan(R) gene expressionassays通過(guò)qPCR方法檢測(cè)5個(gè)基因(γ干擾素受體1和2、趨化因子受體CXCR3、原癌基因MYC和FYN)的表達(dá)水平，分析基因表達(dá)與RA影像學(xué)嚴(yán)重程度的

5、相關(guān)性;(3)大樣本驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。選取580名關(guān)節(jié)破壞程度不同的RA患者及51名健康對(duì)照者，用同樣的方法獲得cDNA樣本并采用qPCR檢測(cè)基因IFNGR1和IFNGR2的表達(dá)水平，分析基因表達(dá)與RA影像學(xué)嚴(yán)重程度的相關(guān)性。該研究納入的患者和對(duì)照者均來(lái)自“非裔美國(guó)人早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者縱向評(píng)價(jià)聯(lián)合項(xiàng)目(Consortium for the Longitudinal Evaluation of African-Americanswith Rhe

6、umatoid Arthritis，CLEAR)”。RA患者的影像學(xué)嚴(yán)重程度由四肢的Sharp/van der Heijde評(píng)分決定。
　　結(jié)果:
　　第一部分:(1)不同疾病嚴(yán)重程度的非裔美國(guó)RA患者具有不同的外周血免疫相關(guān)基因表達(dá)模式;(2)細(xì)胞因子信號(hào)通路、NF-κB通路、絲裂原活化蛋白激酶通路、T細(xì)胞受體通路、Toll樣受體通路、TNF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等與RA的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。
　　第二部分:(1)非裔美國(guó)RA患

7、者外周血中IFNGR1，CXCR3，MYC和FYN基因的表達(dá)水平與RA影像學(xué)嚴(yán)重程度無(wú)明顯相關(guān)性;(2)非裔美國(guó)RA患者外周血中IFNGR2基因表達(dá)水平與RA影像學(xué)嚴(yán)重程度顯著相關(guān)，且其表達(dá)水平越高，疾病越嚴(yán)重。
　　第三部分:(1)與健康對(duì)照組相比，IFNGR1和IFNGR2基因在非裔美國(guó)RA患者外周血中的表達(dá)水平顯著升高;(2) IFNGR2基因表達(dá)水平與非裔美國(guó)RA患者的疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)，而IFNGR1與之不相關(guān);(3)