抗p40抗體抑制實驗性小鼠抗GBM腎炎的作用及機制研究.pdf

1、目的:人類和實驗性的腎小球腎炎以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答和腎小球炎癥反應(yīng)為主要特征。然而,不同的T細(xì)胞亞類之間存在密切的聯(lián)系,比如Th1和Th17細(xì)胞彼此相互影響。Th1和Th17共同參與抗GBM腎炎的免疫過程,IL-12與IL-23分別誘導(dǎo)Th1和Th17的分化,而且有一共同亞基p40,我們利用p40抗體中和體內(nèi)p40,阻斷IL-12/IL-23的功能,觀察實驗性抗GBM腎炎的病理變化及淋巴細(xì)胞亞群的變化,探討anti-p40在小鼠實

2、驗性抗GBM腎炎中的作用及機制。
　　方法:將健康的成年雄性C57BL/6小鼠隨機分成三組,每組20只,每組腹腔注射注射等比例混合的未標(biāo)記兔IgG和完全弗氏佐劑。10天后,模型組開始腹腔注射腎毒性血清,(與不完全弗氏佐劑按4:1比例混合),每周3-4次,持續(xù)4周,并于每周PAS和Masson染色的情況和免疫熒光強度改變,隨時調(diào)整給藥次數(shù);干預(yù)組在給予腎毒性血清的同時,第一周每天給予anti-p40抗體,之后同給予腎毒性血清的時間一

3、致;正常組給予等量的無菌生理鹽水。我們通過腎臟組織的冰凍切片行直接免疫熒光法觀察兔IgG和鼠IgG沿腎小球基底膜的沉積情況,通過石蠟切片PAS染色觀察腎臟的病理改變,以及檢測腎功能(肌酐、尿素氮、尿蛋白)的變化。利用FACS分析評估腎臟及系統(tǒng)免疫中T淋巴細(xì)胞的浸潤情況。
　　結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)FITC標(biāo)記的羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG沿腎小球基底膜線狀沉積,且兔IgG熒光強度隨時間延長逐漸減弱,鼠IgG則逐漸增強。通過PAS染色及腎功能

4、檢測來判斷腎臟損害程度?？梢钥吹侥Ｐ徒M隨時間變化腎小球細(xì)胞增多、炎性細(xì)胞浸潤,并見新月體形成,肌酐尿素氮水平升高,而干預(yù)組則減輕了上述病變發(fā)展。FACS分析提示Th1、Th17分化減少以及腎臟浸潤也隨之減少。
　　結(jié)論:與正常組和模型組比較,anti-p40干預(yù)組減少了腎臟中及全身的Th17、Th1細(xì)胞浸潤,Treg細(xì)胞增多,腎臟損害減輕,腎小球內(nèi)細(xì)胞增生減少,炎性細(xì)胞浸潤減少,光鏡下未見新月體形成。這些結(jié)果說明anti-p40阻