仔鼠睪丸組織移植與冷凍保存試驗.pdf

1、睪丸組織移植與冷凍保存對于動物種質資源的保存具有重要的意義，在拯救瀕危物種上也具有重要的應用價值。該項技術可以保存睪丸組織細胞的完整性和內分泌功能。雄性睪丸中存在有精原干細胞，它是雄性生殖能力保存和恢復的保障。睪丸移植后可產生成熟的精子，若在治療前對睪丸組織進行冷凍保存，即可為腫瘤患者生殖能力的保存提供新選擇。在動物保護領域，有價值的動物在未成年前的死亡所造成的基因多樣性的缺失也是一個嚴重的問題。睪丸組織移植與冷凍保存有望使死亡動物的睪

2、丸重新獲得產生精子的能力。通過比較異位移植后回收的睪丸與供體睪丸的基因表達，已經證實睪丸移植可保存供體睪丸微環(huán)境的完整性，促進精子發(fā)生。通過睪丸組織移植可獲得未成年死亡動物的精子，但睪丸組織移植前的冷凍保存手段尚不完善。本研究通過比較不同部位的睪丸組織移植、不同的移植受體和不同的移植生長時間對組織移植效果的影響，以期篩選出適宜的睪丸組織移植條件;通過比較不同濃度DMSO和不同的降溫方法研究睪丸組織冷凍保存的效果。
　　1.睪丸組織

3、移植試驗
　　本試驗以5日齡C57B6/J小鼠睪丸為研究對象，研究影響睪丸移植的多種因素，包括移植部位、受體和移植時間等，以期篩選出最佳的睪丸移植條件。結果顯示:(1)不同移植部位對移植睪丸生殖細胞分化的影響差異顯著。睪丸白膜內移植后分化情況最好與假移植對照組相似;背部皮下移植后睪丸的分化率為29.2％;腎包膜下移植則未見分化。(2)移植受體裸鼠8周后分化情況優(yōu)于C57BL/6J小鼠受體組(P＜0.01)。(3)移植受體裸鼠10周

4、后分化效果優(yōu)于受體裸鼠8周組(P＜0.05)。研究結果表明:(1)睪九白膜內最利于睪丸組織移植后精子的發(fā)生;背部皮下移植是睪九移植的次優(yōu)選擇;腎包膜下不適用于小鼠的睪丸組織移植。(2)睪丸組織移植于受體裸鼠，效果要好于同品系受體;(3)將睪九移植后生長時間從8周延長到10周，更有利于生殖細胞的分化。
　　2.睪丸組織冷凍保存試驗
　　本試驗以5日齡C57B6/J小鼠睪丸為研究對象，通過比較睪丸細胞核增殖抗原(prolifer

5、ating cell nuclear antigen，PCNA)陽性率，分析不同DMSO濃度和冷凍程序對睪丸組織冷凍效果的影響，并通過冷凍睪丸組織移植進一步驗證冷凍效果。結果顯示:(1)冷凍管投入液氮前，-20℃降溫、液氮蒸汽降溫和冷凍盒-80℃降溫3組的PCNA陽性率差異顯著;以冷凍盒-80℃保存效果最好。(2)使用不同濃度DMSO冷凍保存睪丸組織，對PCNA陽性的影響差異顯著。最佳的DMSO濃度為10％，此濃度冷凍保護效果明顯優(yōu)于5