仔鼠睪丸組織移植與冷凍保存試驗(yàn).pdf

1、睪丸組織移植與冷凍保存對(duì)于動(dòng)物種質(zhì)資源的保存具有重要的意義，在拯救瀕危物種上也具有重要的應(yīng)用價(jià)值。該項(xiàng)技術(shù)可以保存睪丸組織細(xì)胞的完整性和內(nèi)分泌功能。雄性睪丸中存在有精原干細(xì)胞，它是雄性生殖能力保存和恢復(fù)的保障。睪丸移植后可產(chǎn)生成熟的精子，若在治療前對(duì)睪丸組織進(jìn)行冷凍保存，即可為腫瘤患者生殖能力的保存提供新選擇。在動(dòng)物保護(hù)領(lǐng)域，有價(jià)值的動(dòng)物在未成年前的死亡所造成的基因多樣性的缺失也是一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題。睪丸組織移植與冷凍保存有望使死亡動(dòng)物的睪

2、丸重新獲得產(chǎn)生精子的能力。通過(guò)比較異位移植后回收的睪丸與供體睪丸的基因表達(dá)，已經(jīng)證實(shí)睪丸移植可保存供體睪丸微環(huán)境的完整性，促進(jìn)精子發(fā)生。通過(guò)睪丸組織移植可獲得未成年死亡動(dòng)物的精子，但睪丸組織移植前的冷凍保存手段尚不完善。本研究通過(guò)比較不同部位的睪丸組織移植、不同的移植受體和不同的移植生長(zhǎng)時(shí)間對(duì)組織移植效果的影響，以期篩選出適宜的睪丸組織移植條件;通過(guò)比較不同濃度DMSO和不同的降溫方法研究睪丸組織冷凍保存的效果。
　　1.睪丸組織

3、移植試驗(yàn)
　　本試驗(yàn)以5日齡C57B6/J小鼠睪丸為研究對(duì)象，研究影響睪丸移植的多種因素，包括移植部位、受體和移植時(shí)間等，以期篩選出最佳的睪丸移植條件。結(jié)果顯示:(1)不同移植部位對(duì)移植睪丸生殖細(xì)胞分化的影響差異顯著。睪丸白膜內(nèi)移植后分化情況最好與假移植對(duì)照組相似;背部皮下移植后睪丸的分化率為29.2％;腎包膜下移植則未見(jiàn)分化。(2)移植受體裸鼠8周后分化情況優(yōu)于C57BL/6J小鼠受體組(P＜0.01)。(3)移植受體裸鼠10周

4、后分化效果優(yōu)于受體裸鼠8周組(P＜0.05)。研究結(jié)果表明:(1)睪九白膜內(nèi)最利于睪丸組織移植后精子的發(fā)生;背部皮下移植是睪九移植的次優(yōu)選擇;腎包膜下不適用于小鼠的睪丸組織移植。(2)睪丸組織移植于受體裸鼠，效果要好于同品系受體;(3)將睪九移植后生長(zhǎng)時(shí)間從8周延長(zhǎng)到10周，更有利于生殖細(xì)胞的分化。
　　2.睪丸組織冷凍保存試驗(yàn)
　　本試驗(yàn)以5日齡C57B6/J小鼠睪丸為研究對(duì)象，通過(guò)比較睪丸細(xì)胞核增殖抗原(prolifer

5、ating cell nuclear antigen，PCNA)陽(yáng)性率，分析不同DMSO濃度和冷凍程序?qū)ΣG丸組織冷凍效果的影響，并通過(guò)冷凍睪丸組織移植進(jìn)一步驗(yàn)證冷凍效果。結(jié)果顯示:(1)冷凍管投入液氮前，-20℃降溫、液氮蒸汽降溫和冷凍盒-80℃降溫3組的PCNA陽(yáng)性率差異顯著;以冷凍盒-80℃保存效果最好。(2)使用不同濃度DMSO冷凍保存睪丸組織，對(duì)PCNA陽(yáng)性的影響差異顯著。最佳的DMSO濃度為10％，此濃度冷凍保護(hù)效果明顯優(yōu)于5