蘆薈汁中膠原酶抑制成分的分離純化與抑制作用研究.pdf

1、本論文主要對蘆薈汁中膠原酶活性抑制成分進(jìn)行了研究，包括膠原酶活性和抑制劑抑制效果測定方法、蘆薈汁干粉中有效抑制成分的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定與抑制效果測定，初步探討了可能的抑制機(jī)理并進(jìn)一步尋找到其它具有抑制作用的植物提取物。 實驗首先研究了羥脯氨酸化學(xué)比色法的影響因素，確定實驗條件：1.0mL待測溶液中加入2.0mL異丙醇，1.0mL氧化劑氧化5min，再加入2.0mL顯色劑，60℃加熱顯色20min，冰浴冷卻5min后測定561nm

2、處的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算羥脯氨酸質(zhì)量。 以羥脯氨酸含量測定為檢測手段，初步研究了膠原酶對膠原蛋白的酶解反應(yīng)過程，并在此基礎(chǔ)上設(shè)計了膠原酶活性及抑制劑抑制效果測定方法：膠原蛋白10mg，膠原酶液濃度0.1mg/mL，反應(yīng)溫度37.0℃；TriS-HCl(三羥甲基氨基甲烷—鹽酸)緩沖溶液中膠原酶催化降解固態(tài)不溶性膠原蛋白分解為可溶性肽進(jìn)入溶液，反應(yīng)終止后濾除未反應(yīng)膠原蛋白，濾液加濃鹽酸密封加熱酸解后測定其中游離羥脯氨酸的質(zhì)量；

3、抑制劑與空白實驗的羥脯氨酸質(zhì)量差值體現(xiàn)出抑制劑的抑制效果。 實驗發(fā)現(xiàn)蘆薈汁干粉中葸醌苷類化合物具有明顯的膠原酶抑制效果；蘆薈汁干粉先用熱水煎煮，濾液經(jīng)乙酸乙酯萃取，除去溶劑后得粗提取物；該粗提取物再經(jīng)硅膠柱層析分離多次，得到含有兩種主要物質(zhì)的混合物；最后經(jīng)半制備高效液相色譜分離出兩種純物質(zhì)；經(jīng)定性實驗和HPLC、UV、IR、MS、1HNMR譜圖鑒定化學(xué)結(jié)構(gòu)，分別確定為蘆薈素和異蘆薈素。抑制效果測定結(jié)果表明兩者具有相似的抑制效果并