鈣通道阻斷劑對低鉀狀態(tài)下大鼠缺血—再灌注心功能恢復(fù)的作用觀察.pdf

1、低鉀血癥是心源性猝死的重要因素之一，但其作用機(jī)制并不十分清楚。前期工作發(fā)現(xiàn)，低鉀狀態(tài)下心肌在缺血后再灌注期胞內(nèi)鈣振蕩加重，心功能顯著降低。本課題觀察L-型鈣通道阻斷劑硝苯地平和鈣激活蛋白酶Calpain在低鉀惡化心功能中的作用。
　　目的：
　　1．比較正常鉀灌注液（5.9mMK+）和低鉀灌注液（含3.1mMK+）對缺血-再灌注心功能的影響。
　　2．應(yīng)用低鈣灌注液（含0.5mMCa2+的KH液）后，觀察低鉀灌注液和正

2、常鉀灌注液心臟在經(jīng)歷缺血-再灌注后心功能的改變。
　　3．應(yīng)用calpain抑制劑MDL-28170后，觀察低鉀灌注液和正常鉀灌注液心臟在經(jīng)歷缺血-再灌注后心功能的改變。
　　4．應(yīng)用L-型鈣通道阻滯劑硝苯地平后，觀察低鉀灌注液和正常鉀灌注液心臟在經(jīng)歷缺血-再灌注后心功能的改變。
　　5．在有或無低鈣灌注液（含0.5mMCa2+的KH液）干預(yù)時，比較低鉀灌注液和正常鉀灌注液心臟在經(jīng)歷缺血-再灌注后cTnI的降解。

3、>　　方法：
　　以離體大鼠心臟作為研究對象，平衡之后接受1h全心缺血和1h再灌注處理。應(yīng)用低鈣灌注液（含0.5mMCa2+的KH液）干預(yù)在再灌注前15min，應(yīng)用MDL-28170干預(yù)在缺血前3min和再灌注前10min，應(yīng)用硝苯地平(1μmol/L)干預(yù)為再灌注前15min。實(shí)驗(yàn)中采用AcqKnowledge信號采集系統(tǒng)全程記錄左室LVP的變化。通過計(jì)算LVDP、LVEDP和±dp/dt的變化來評價(jià)左室收縮功能；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，從

4、每個心臟中剪取部分左心肌進(jìn)行勻漿，通過westernblot方法觀察cTnI的降解。
　　結(jié)果：
　　1.正常鉀KH液（含5.9mMK+的KH液）灌注心臟在接受缺血/再灌注處理后，正常鉀KH液灌注心臟在接受1h缺血1h再灌注處理后，LVDP、恢復(fù)至缺血前60.9±8.3％，LVEDP升高至22.1±4.2mmHg，dp/dt恢復(fù)至缺血前的68.8％±5.7％，-dp/dt恢復(fù)至59.2％±5.0％。與正常鉀KH液灌注條件相比

5、，低鉀KH液灌注使得缺血-再灌注處理后LVDP、dp/dt及-dp/dt進(jìn)一步降低（p<0.05），LVEDP進(jìn)一步升高（p<0.05）。證實(shí)低鉀灌注惡化缺血-再灌注心功能。
　　2.正常鉀灌注液中應(yīng)用低鈣灌注液（含0.5mMCa2+的KH液）干預(yù)后，在心臟經(jīng)歷缺血-再灌注后，低鈣灌注液使得LVDP、dp/dt及-dp/dt恢復(fù)率都能提高；在低鉀灌注液中應(yīng)用低鈣灌注液（含0.5mMCa2+的KH液）干預(yù)后，低鈣灌注液提升LVDP、

6、dp/dt及-dp/dt恢復(fù)率的幅度在低鉀組顯著大于正常鉀組。結(jié)果提示，鈣介導(dǎo)了低鉀惡化缺血-再灌注心功能這一過程。
　　3.正常鉀灌注液和低鉀灌注液中加入MDL-28170（3μM），在心臟經(jīng)歷缺血再灌注后，MDL-28170都能使心肌收縮功能提高，但是MDL-28170（10μM）都能使心肌收縮功能下降，但通過統(tǒng)計(jì)分析顯示低鉀組與正常鉀組不存在顯著性差異。結(jié)果提示，calpain可能未參與低鉀液加重缺血-再灌注損傷這一效應(yīng)。<

7、br>　　4.正常鉀灌注液中加入硝苯地平(1μmol/L)，在心臟經(jīng)歷缺血再灌注硝苯地平能使心肌收縮功能提高，但在低鉀灌注液中加入硝苯地平后，使得LVEDP顯著抬高（p<0.05），對LVDP、dp/dt和-dp/dt雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異影響，但有降低趨勢，提示低鉀狀態(tài)下硝苯地平惡化心臟舒張功能。
　　5.與正常鉀灌注相比，低鉀灌注心臟在經(jīng)歷缺血-再灌后，cTnI的降解明顯增加，而低鈣灌注液可降低cTnI的降解。因此我們設(shè)想，cTnI降