兔腰大肌三聚磷酸鹽水解酶的純化及酶學(xué)特性研究.pdf

1、本試驗(yàn)從新西蘭大白兔腰大肌中分離提純肌球蛋白。通過(guò)兩次調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度，35-48％硫酸銨分級(jí)沉淀，DEAE-纖維素柱層析對(duì)粗酶液進(jìn)行純化。對(duì)純化過(guò)程中蛋白液的三聚磷酸酶活性采用鉬藍(lán)比色法進(jìn)行測(cè)定，研究發(fā)現(xiàn)粗酶液中比活力較低，僅為0.000374U/mg，通過(guò)兩次調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度去除部分雜蛋白后，比活力上升為0.003681U/mg，35-48％硫酸銨分級(jí)沉淀后，純化倍數(shù)為13.5，最后經(jīng)過(guò)DEAE-纖維素柱層析后純化倍數(shù)為28，用SDS-聚丙

2、烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，純化后的蛋白酶泳道條帶為肌球蛋白的四種亞基條帶，分別為一條220KDa的重鏈和三條分子量10-25KDa的輕鏈。由此可知，兔腰大肌肌球蛋白具有三聚磷酸酶活性。 對(duì)兔腰大肌肌球蛋白三聚磷酸酶特性進(jìn)行研究，三聚磷酸酶的活性測(cè)定采用鉬藍(lán)比色法，研究發(fā)現(xiàn)，兔腰大肌肌球蛋白三聚磷酸酶的最適pH為6.5，最適溫度為35℃。Mg2+是三聚磷酸酶的激活劑，在Mg2+濃度為3mM左右有最佳激活效果。Ca2+對(duì)三聚磷酸酶也有

3、激活作用，Ca2+濃度在0-6mM范圍內(nèi)時(shí)，三聚磷酸酶活性隨Ca2+濃度的增加而增加，當(dāng)Ca2+濃度大于6mM后，三聚磷酸酶活性趨于穩(wěn)定。EDTA-Na2對(duì)三聚磷酸酶活性無(wú)顯著影響。EDTA-Na4和KIO3對(duì)三聚磷酸酶具有抑制作用，且KIO3的抑制效果比EDTA-Na4好。 本試驗(yàn)還研究了三聚磷酸酶的活性對(duì)兔腰大肌肌球蛋白流變學(xué)特性的影響。六偏磷酸鹽處理的兔腰大肌肌球蛋白其流變學(xué)測(cè)定中的G'和G"值明顯大于焦磷酸鹽和三聚磷酸鹽