TNF-α、IL-10單核甘酸多態(tài)性與乙型肝炎病毒感染臨床轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一個全球性的問題，嚴(yán)重危害著人類的健康和生活質(zhì)量。 HBV 感染人體后可導(dǎo)致不同的臨床結(jié)局，從自限性感染者、無癥狀攜帶者、隱匿性感染者到急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化直至原發(fā)性肝癌。目前國內(nèi)外研究大多集中于HBV本身，認(rèn)為病毒的不同基因型或病毒基因某些位點的突變是導(dǎo)致感染HBV后產(chǎn)生不同臨床轉(zhuǎn)歸的原因。事實上，人類感染HBV后，病毒能否被徹底清除，是否導(dǎo)致慢性化

2、，更大程度上取決于個體的抗病毒免疫水平，與免疫因素相關(guān)的個體遺傳背景是影響乙型病毒性肝炎轉(zhuǎn)歸的重要因素。 T 細(xì)胞免疫在乙肝病毒致病過程中起著重要作用，它不僅在控制病毒復(fù)制方面有著決定性作用，而且在乙肝病毒肝損傷方面扮演重要角色。實驗表明乙肝病毒抗原特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(HBV antigens specific cytotoxic lymlohocytes，HBVsCTL)應(yīng)答在乙肝感染中有著重要作用。HBV感染初期HBVs

3、CTL 能完全清除HBV而不引起免疫損傷，隨著特異性細(xì)胞毒T細(xì)胞數(shù)的減少，非特異性免疫活性細(xì)胞在肝內(nèi)浸潤、凋亡激活，引起肝臟損傷。殺傷性T細(xì)胞(CTL)亞群的變化與CD4+輔助性T細(xì)胞(Th)及其細(xì)胞因子密切相關(guān)。Th細(xì)胞分為三類：Th0、Th1、Th2；Th1類細(xì)胞因子(TNF-α、IL-2、IFN-γ)促進(jìn)細(xì)胞免疫，對HBVsCTL的功能有輔佐作用，有利于病毒的清除；而Th2類細(xì)胞因子(IL-10、IL-6、IL-4)則對Th1細(xì)胞

4、有抑制作用，它抑制細(xì)胞免疫，增強(qiáng)體液免疫，主要與組織損傷及慢性化有關(guān)。這些與Th細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子密切影響著HBV對組織細(xì)胞的損傷，病毒的清除和疾病的慢性化。近年來研究發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子編碼區(qū)、調(diào)節(jié)區(qū)或信號序列區(qū)存在多態(tài)性，影響著細(xì)胞因子的表達(dá)與分泌，與HBV感染的慢性化相關(guān)。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphisms,SNP)指人類基因組核苷酸序列中發(fā)生頻率大于1％的單個堿基變異(不包括缺失、插入與重復(fù)

5、)。SNP是DNA多態(tài)性的一種，其數(shù)目眾多、分布廣泛且相對穩(wěn)定，各細(xì)胞因子基因都存在多個SNP位點，而各位點不同基因型可能與HBV感染機(jī)體后不同臨床結(jié)局有關(guān)。其中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與白介素-10(IL-10)作為Th細(xì)胞亞群的兩個重要因子，其啟動子區(qū)單核甘酸多態(tài)性影響著他們的表達(dá)，并可能與HBV感染的臨床轉(zhuǎn)歸存在聯(lián)系。 目的： 檢測河北地區(qū)感染乙型肝炎病毒后不同臨床結(jié)局人群TNF-α與IL-10啟動子區(qū)單核苷

6、酸多態(tài)性分布，探討其多態(tài)性與乙肝病毒感染不同臨床轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性，為乙肝病毒的預(yù)防與基因治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法： 本研究包括乙肝病毒自限性感染者57例，乙肝病毒健康攜帶者51例，慢性乙型肝炎61例，乙肝肝硬化患者82例；所有標(biāo)本提取DNA后，應(yīng)用等位基因特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng)(AS-PCR)法檢測TNF-α-238、-308與IL-10-816位點單核苷酸多態(tài)性，并每種基因型選取一例進(jìn)行直接測序；比較各組等位基因與基因型

7、的分布，并收集相關(guān)的臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果： 1.本實驗共測定SNP位點753次，其中744次檢測成功，成功率98.8％；同時檢測到TNF-α-238及-308位AA基因型，頻率分別為1.6％(4例)與0.8％(2例)，與抽取的直接測序結(jié)果完全相符。 2.TNF-α基因啟動子區(qū)-238(G/A)位點SNP多態(tài)性與HBV感染后臨床轉(zhuǎn)歸相關(guān)。其中GG基因型在肝硬化組(76.3％)、慢乙肝組(78.7％)較自限性感染者組

8、(87.5％)、健康攜帶者組(88.2％)明顯減少(p＜0.05)；GA基因型明顯增多(p＜0.05)；A等位基因頻率在肝硬化組(13.1％)、慢乙肝組(11.4％)較自限性感染者組(7.1％)、健康攜帶者組(5.9％)明顯增高(p＜0.05)；慢乙肝組與肝硬化組，自限性感染者組與健康攜帶者組之間基因型分布與等位基因頻率比較無顯著性差異(p＞0.05)。 3.TNF-α基因啟動子區(qū)-308(G/A)位點SNP多態(tài)性與HBV感染后

9、臨床轉(zhuǎn)歸可能無關(guān)?；蛐?GG、GA、AA)分布及G、A等位基因頻率在自限性感染者、健康攜帶者、慢乙肝、肝硬化四組之間比較差異無顯著性(p＞0.05)。 4 IL-10基因啟動子區(qū)-819(T/C)位點SNP多態(tài)性與HBV病毒感染后臨床轉(zhuǎn)歸相關(guān)。其中TT基因型在肝硬化組(59.3％)、慢乙肝組(55.7％)分布較自限性感染者組(35.1％)、健康攜帶者組(37.2％)明顯增多(p＜0.05)，CT基因型明顯減少(p＜0.05)，

10、C等位基因頻率在肝硬化組(28.4％)、慢乙肝組(29.5％)較自限性感染者組(43.0％)、健康攜帶者組(41.1％)明顯減少(p＜0.05)；肝硬化組與慢乙肝組，自限性感染者組與健康攜帶者組之間比較無顯著性差異(p＞0.05)。 5 IL-10基因啟動子區(qū)-819(T/C)位點TT基因型中肝硬化者(39.7％)、慢乙肝者(28.1％)所占比率明顯高于TC、CC基因型(p＜0.05)；T等位基因中肝硬化者(35.5％)所占比率明顯高于

11、C等位基因(p＜0.05)；其他病例組在各基因型及T、C等位基因中所占比率無明顯差別(p＞0.05)。 結(jié)論： 1.采用AS-PCR方法可以簡便的檢測出細(xì)胞因子基因啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性基因型分布。 2.TNF-α基因啟動子區(qū)-238位不同基因型和A等位基因可能與個體感染HBV后臨床轉(zhuǎn)歸相關(guān)。 3未發(fā)現(xiàn)TNF-α基因啟動子區(qū)-308位不同基因型和等位基因與乙肝臨床轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性。 4 IL-10基因