蠅蛆組織勻漿液及其酶解物中抑菌組分的研究.pdf

1、本研究體外觀察了蠅蛆組織勻漿液及其酶解液組分對(duì)病原性大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌增殖的影響；結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討了勻漿液及其酶解液對(duì)動(dòng)物抗大腸桿菌、沙門氏菌感染的作用；并利用SephadexG-15及RP-HPLC技術(shù)對(duì)有效抑菌組分進(jìn)行了初步的分離與鑒定，為天然抗菌物質(zhì)的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1、蠅蛆組織勻漿液對(duì)細(xì)菌增殖的影響以及對(duì)小鼠的抗感染保護(hù)研究以人工培養(yǎng)的新鮮蠅蛆為原料，采用磷酸鹽緩沖液勻漿，觀察勻漿液及其熱

2、滅活液，對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌增殖的影響。結(jié)果表明，蠅蛆組織勻漿液顯著抑制大腸桿菌和沙門氏菌的增殖，而顯著促進(jìn)金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的增殖。蠅蛆組織勻漿液加熱滅活后抑菌生物活性喪失。根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，探討蠅蛆組織勻漿液在動(dòng)物體內(nèi)抗大腸桿菌和沙門氏菌感染保護(hù)作用，通過(guò)體內(nèi)攻菌實(shí)驗(yàn)確定LD<,50>。選用28日齡昆明系清潔級(jí)雄性小鼠60只，隨機(jī)分為3個(gè)處理組(n=20)：正常對(duì)照組：基礎(chǔ)日糧+生理鹽水；蠅蛆組織勻漿

3、液熱滅活液組：基礎(chǔ)日糧+蠅蛆組織勻漿液熱滅活液；組織勻漿液組：基礎(chǔ)日糧+組織勻漿液。各處理組灌喂液體積相等，0.3mL/只，連續(xù)灌喂7天后，第8天將E.coli(菌濃為1.80×10<'11>CFU/L)/沙門氏菌(菌濃為2.70×10<'11> CFU/L)分別灌喂組織勻漿液熱滅活液組和組織勻漿液組，0.3mL/只。觀察小鼠發(fā)病及死亡情況直至灌菌后56 h，處死各組小鼠，取盲腸食糜，用平板細(xì)菌計(jì)數(shù)法測(cè)定食糜內(nèi)特定細(xì)菌的含量。結(jié)果顯示小

4、鼠灌喂蠅蛆組織勻漿液后，能顯著提高灌喂1.8×10<'11> CFU/L E.coli后小鼠的健康水平(比對(duì)照組提高了83.25％)和2.7×10<'11> CFU/L的沙門氏菌后小鼠的健康水平(比對(duì)照組提高了42.85％)，并且盲腸食糜內(nèi)特定細(xì)菌數(shù)量，實(shí)驗(yàn)組也均顯著低于對(duì)照組(p<0.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蠅蛆組織勻漿液在體外能抑制大腸桿菌和沙門氏菌的生長(zhǎng)，在體內(nèi)能抵御外源性大腸桿菌和沙門氏菌的侵襲感染，預(yù)防胃腸道疾病的發(fā)生。

5、 2、蠅蛆組織勻漿液酶解液對(duì)細(xì)菌增殖的影響以及對(duì)小鼠的抗感染保護(hù)研究蠅蛆組織勻漿液分別經(jīng)胰蛋白酶、胃蛋白酶酶解后，觀察其分別對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌四種細(xì)菌增殖的影響。結(jié)果表明，胰酶酶解組分對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的增殖有顯著的抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草桿菌有顯著的促進(jìn)作用；胃蛋白酶酶解組分對(duì)四種細(xì)菌均起到促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。同時(shí)胰蛋白酶酶解液加熱滅活后其生物活性沒(méi)有發(fā)生顯著性變化。根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，探討蠅蛆組織勻

6、漿液胰蛋白酶酶解液在動(dòng)物體內(nèi)抗大腸桿菌和沙門氏菌感染保護(hù)作用，通過(guò)體內(nèi)攻菌實(shí)驗(yàn)確定LD<,50>。選用28日齡昆明系清潔級(jí)雄性小鼠50只，隨機(jī)分為3個(gè)處理組(正常對(duì)照組10只，其余兩組各20只)：正常對(duì)照組：基礎(chǔ)日糧+生理鹽水；試驗(yàn)對(duì)照組：基礎(chǔ)日糧+生理鹽水；胰酶酶解液組：基礎(chǔ)日糧+胰蛋白酶酶解液。各處理組灌喂液體積相等，0.3mL/只，連續(xù)灌喂7天后，第8天將E.coli(菌濃為3.38×10<'11> CFU/L)/沙門氏菌(菌濃為

7、2.87×10<'11> CFU/L)分別灌喂試驗(yàn)對(duì)照組和酶解液組，0.3mL/只，觀察小鼠發(fā)病及死亡情況直至灌菌后56 h，處死各組小鼠，取盲腸食糜，用平板細(xì)菌計(jì)數(shù)法測(cè)定食糜內(nèi)特定細(xì)菌的含量。結(jié)果顯示小鼠灌喂胰酶酶解液后，能顯著提高灌喂3.38×10<'11> CFU/L E.coli、2.87×10M<'11> CFU/L的沙門氏菌后小鼠的健康水平(實(shí)驗(yàn)組分別比對(duì)照組提高了25.02％和14.27％)，并且盲腸食糜內(nèi)特定細(xì)菌的數(shù)量實(shí)

8、驗(yàn)組也均顯著低于對(duì)照組(p<0.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明胰酶酶解液在體外能抑制大腸桿菌和沙門氏菌的生長(zhǎng)，在體內(nèi)能抵御外源性大腸桿菌和沙門氏菌的侵襲感染，預(yù)防胃腸道疾病的發(fā)生。 3、蠅蛆組織勻漿液胰蛋白酶酶解液中抑菌組分的分離蠅蛆組織勻漿液胰蛋白酶酶解液經(jīng)SephadexG-15層析柱后，收集到3個(gè)主要吸收峰，觀察不同組分對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌四種細(xì)菌的增殖作用。結(jié)果表明，3號(hào)峰組分對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的增